5种多房棘球绦虫续绦期幼虫的制备RNA方法比较及长片段DNART_PCR扩增方法.pdfVIP

2004, 20 ( 10) Chinese J urnal f Z n ses 863 : 1002- 2694( 2004) 10- 0863- 05 5 种多房棘球绦虫续绦期幼虫的制备RNA方法比较 及长片段DNA RT- PCR 扩增方法研究 1 2 3 3 王昌源 , 张洪花, 陈雅棠 , 刘 杞 : 探讨从多房棘球绦虫续绦期幼虫制备RNA 的最佳方法, 研究逆转录P CR 扩增DNA 长片段目的基 的方 法 应用改良的琼脂糖核酸电泳方法和RT - P CR 技术比较观察了5 种商品化RNA/ mRNA 提取试剂/ 试剂盒用于提 取多房棘球绦虫续绦期幼虫RNA 的效果; 用琼脂糖凝胶电泳方法观察比较了不同的DNA 聚合酶用于RT - PCR 扩增长片段 EM Ò/ 3( 1. 72kb) 和EM 10( 1. 76kb) 的效果 总 RNA 提取试剂盒( RNeasy T tal RNA Kit) 提取的多房棘球绦虫续绦期 幼虫RNA 电泳显示出清晰的28 S18 S rRNA 条带和弥散于0. 8kb 至20kb 之间未降解的mRNA , 是唯一能逆转录扩增出单 一目的条带的核酸提取物T aq DNA 聚合酶与高保真DNA 聚合酶Pfu 的混合制剂T aq Plus 应用于RT - P CR 可扩增出大量 1720bp 和1760bp 单 一目的基 总RNA 提取试剂盒( RNeasy T tal RNA Kit) 对多房棘球绦虫续绦期幼虫RNA 的提 取效果最好; T aq Plus 适合用于RT - PCR 扩增长片段目的基 : 长片段DNA, 逆转录, 聚合酶链式反应, 多房棘球绦虫, DNA 聚合酶, RNA 制备方法 : R383 : A Comparison on five methods for extraction of RNA from Echinococcus multilocularis metacestode Larva and Studies on amplification of DNA long fragments with RT-PCR WANG Chang-yuan, ZHANG H ng-hua, CHEN Ya-tang, LIU Qi (Division of Inf ectious Diseases, Shandong University School of Medicine, Jinan 25002 1) A STRACT:In rder t find ut the best meth d f r extracti n f RNA fr m Echinococcus multilocularis metacest de larva ( EMML) and t make a study n meth d f r amplificati n f DNA l ng fragments w ith reverse transcriptase p lymerase chain reac- ti n( RT-PCR) , t he effects f five c mmercialized reagents r kits f r extracti n f RNA/ mRNA fr m EMML were evaluated with a m dified agar se gel electr ph resis and RT-PCR technique. The effectiveness f different DNA p lymerase used in RT-PCR f r am- plificat i n f l ng fragments EM Ò/ 3( 1720bp) and EM 10( 1760bp) was asses