CFSE示踪与流式细胞仪检测法研究环磷酰胺对T淋巴细胞增殖的影响.pdfVIP

· 828。 中国药理学通报 ChinesePharnmcologicalBulletin 2010Jun：26(6)：828～31 ◇实验方法学◇ CFSE示踪与流式细胞仪检测法 研究环磷酰胺对 T淋巴细胞增殖的影响 包晶晶，林海霞，马 琮 (上海医药工业研究院国家上海新药安全评价研究中心，上海 201203) 中国图书分类号：R一332；R329．24；R331．125；R979．1； 来获取单个细胞水平上细胞增殖的动力学参数如细胞分裂 R 979．5 率、死亡率、进入第一代分裂的时间、平均细胞周期、平均分 文献标识码：A 文章编号：1001—1978(2010)o6—0828—05 裂数等参数。目前定量分析的方法已应用在小鼠和人源的 摘要：目的 利用定量分析羧基荧光素乙酰乙酸 (carboxyflu— 的T、B细胞检测上 I4。让人惊讶的是，所有的淋巴细胞都 oreseeindiaeetatesuccinimidylester，CFSE)时问系列数据的 遵循相似的动力学和随机的特征。因此可以标准化该模型 方法研究淋巴细胞细胞增殖动力学及免疫抑制剂对淋巴细 来获取关于细胞增殖的信息 J。 胞增殖抑制机制的研究。方法 环磷酰胺造成小 鼠免疫抑 淋巴细胞的增殖有一些关键的参数是实验和分析方法 制模型，并用CFSE染料给对照组和给药组动物的淋巴细胞 的基础也是本实验中模型拟合的基础。首先是进入第一代 染色，通过数学模型拟合法分析数据。结果 对照组和给药 分裂的时间。T、B细胞的分裂是不同步的，主要原因就是它 组淋巴细胞增殖进入第一代分裂的时间分别是27．17h和 们进入第一代分裂的时间不同 。高斯分布模型和 Cyton 22．88h，每代细胞死亡率分别为20％和40％；进入分裂前的 模型都可以用来拟合细胞进入第一代分裂的时间。其次是 细胞半衰期分别为31．53h和43．32h。结论 通过数学拟 每代分裂细胞的死亡率，它决定每一代细胞的丢失数 目。另 合法对 CFSE数据进行定量分析，探讨药物对淋巴细胞增殖 外一个关键参数是进入分裂前的细胞半衰期，即分裂前细胞 影响的机制，该实验中的药物环磷酰胺抑制淋巴细胞增殖的 的死亡数 ，除了机械因素造成的细胞死亡外，未被刺激和未 方式可能是使细胞增殖时每代细胞的死亡率增加所致。 分裂的细胞也会死亡。体内试验研究表明由于去除了刺激 增殖的因素，未分裂的细胞的死亡时间会延长。该死亡过程 近似单相指数衰减过程，通过指数拟合即可以获得细胞分裂 关键词：CFSE；定量分析；数学拟合 ；流式细胞仪；淋巴细胞 前的半衰期 。 增殖；环磷酰胺 本实验主要采用Hawkins标准化的较为简单的前体细 传统的测定淋巴细胞增殖的方法只能通过细胞数量的 胞数 (precursorcohortmethod)的方法 ，即通过作图软件和 EXCELL软件来处理数据。获取T淋 巴细胞增殖的进入第 变化来反映细胞增殖的的变化，不能更深入的洞察细胞增殖 一 代分裂的时间、每代细胞的死亡率、进入第一代分裂前的 是如何被改变的。例如 H参人法检测增殖时，一组细胞 (假 半衰期等参数，分析了环磷酰胺对淋巴细胞增殖的影响机 定为A组)摄人 H的量多于另一个组别 (假定为B组)时会 制。该