造纸废水纸浆沉淀物中未培养微生物纤维素酶基因的克隆和鉴定.pdfVIP

卷 期 ! # 微 生 物 学 报 !（）： # ’() * ’(( 年 月 日 $%% % ! !#$ %’()(*(+$ ,-$ ! +,-./01 $%% !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 造纸废水纸浆沉淀物中未培养微生物纤维素酶基因的克隆和鉴定 ， ， ， ， $ $ $ $ $ 许跃强 ，段承杰 ，周权能 ，唐纪良 ，冯家勋 $ （广西大学 广西亚热带生物资源保护利用重点实验室 生命科学与技术学院 南宁 #)%%%# ） 摘 要：提取纯化造纸废水纸浆沉淀物的宏基因组IJ2 并构建K 1IJ2 文库，系统发育分析显示该环境中存在大 量的未培养细菌且具有种类的多样性。以柯斯质粒为载体构建了 个含 %%%% 个克隆的宏基因组文库，文库容量 为 ( 。筛选文库得到 个表达内切葡聚糖酶活性的克隆、个表达外切葡聚糖酶活性的克隆和 个表达 ) L#) M % /A $ ) $ 5葡萄糖苷酶活性的克隆。从表达不同活性的克隆中分别挑选活性最强的进行鉴定，得到 个新的纤维素酶基因 ! ) 、 和 。 、 和 分别编码产生内切葡聚糖酶、纤维糊精酶和 葡萄糖 !#$%#N !#$%#O !’%)I !#$%#N !#$%#O !’%)I 5 ! 苷酶，其编码产物与已报道的纤维素酶一致性最高的分别为 、 和 。这是第一次采用未培养方法对造 !)P !(P ! P 纸废水纸浆沉淀物中的细菌多样性进行分析并从中克隆纤维素酶基因的报道。 关键词：纸浆沉淀物；细菌多样性；未培养微生物；宏基因组文库；纤维素酶 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） Q’( 2 %%%5$%6 $%% %#5%’()5% ［］ 纤维素是由吡喃型 葡萄糖以 ，糖苷键连 因 。因此，构建纤维素被活跃降解环境的宏基因组 I5 5 !5 ! 接而成的直链状大分子，是地球上最丰富的生物质 文库将有可能克隆到性能优良的纤维素酶基因。 （ ）资源。纤维素的降解涉及到一组复合的纤 造纸废水中富含纸浆，纸浆在废