细胞培养的污染.pptVIP

细胞培养的外源 污染和预防控制 一、概念 凡混入培养环境中对细胞生存有害的成分和造成细胞不纯的异物都视为污染，细胞污染不能完全被消除，但能减少其发生的频率和后果的严重性。细胞污染根据污染源主要可以分为物理性，化学性和生物性污染。 。 二、细胞污染的分类 物理污染 化学污染 生物污染（支原体污染） 物理性污染的来源、危害及预防 物理性污染常常被人们所忽视或被笼统地归为化学性污染。物理性污染通过影响细胞培养体系中的生化成分，从而影响细胞的代谢。培养环境中的物理因素，如温 度、放射线、振动、辐射(紫外线或荧光)会对细胞产生影响。细胞、培养液或其它培养试剂暴露于放射线、辐射或过冷过热的温度中，可以引起细胞代谢发生改变，如细胞同步化、细胞生长受抑制甚至细胞死亡。通过实验室的合理设计及建立规范的操作规程，可以减少环境中物理因素对细胞的影响。孵箱应放在温度较恒定的环境中，周围不能放置能引起机械振动的设备，如离心机。培养液及培养试剂应放在固定的位置，为避免光照试剂不能放在玻璃门的冰箱中，试剂周围不能放同位素。培养液从冰箱中取出后应在室温中放置一段时间后再进行实验，以避免过冷的温度对细胞的影响。 微生物污染 ——细菌、真菌、支原体、病毒、原虫等。 由于体外培养的细胞自身没有抵抗污染的能力，而在培养基中加抗生素的抗污染能力也是有限的，因而细胞微生物污染一旦发生往往是无法挽救的。一般在细胞受到污染早期或污染较轻时，能及时处理并除去污染物，部分细胞还有可能得到挽救。但当细胞持续在污染环境中生长时，轻者细胞生长缓慢，分裂相减少，细胞变得粗糙，轮廓增强，胞浆中出现较多的颗粒物质；较重的细胞增殖停止，分裂相消失，细胞质中出现大量堆积物，细胞变圆或崩解，从瓶壁脱落。不同的微生物污染物对细胞的影响也有差别，微生物中支原体和病毒对细胞形态和技能的影响是长期的，缓慢的和潜在的。而霉菌和细菌增殖迅速，能在很短的时间内抑制细胞生长或产生有毒物质杀灭细胞。 化学性污染的来源、危害及预防 　 培养环境中许多化学物质都可以引起细胞的污染。化学物质并不总是抑制细胞的生长，某些化学物质如激素就可促进细胞的生长。不同细胞对化学物质污染的反应是不一样的。未纯化的物质、试剂、水、血清、生长辅助因子及储存试剂的容器都可能成为化学性污染的来源。细胞培养的必需养分，如氨基酸，若浓度超过了合适的范围，也会对细胞产生毒性。玻璃制品清洗过程中残留的变性剂或肥皂是最常见的化学性污染。水是唯一一种在凝固时膨胀的化合物。因此在选择冻存细胞的容器时应考虑到这个因素。容器因水的膨胀而发生破裂是引起试剂污染的重要原因。为了避免金属离子、有机分子、细胞内毒素等物质对水的污染，在配制液体，清洗容器时必须使用不含杂质的超纯水。需要注意的是，超纯水放置过久其纯度会下降。在高压蒸气灭菌及蒸馏水时水经常被污染，因为高压蒸气锅及纯水机的常规维护后可能有少量的化学物质残留。为了保证水的纯度，我们应采取措施尽量避免化学物质的残留。 三、污染对培养细胞的影响： 1． 细胞受有害物污染时间短，程度轻并能及时排除污染物的情况下，部分细胞可恢复，特别是化学物污染。 2．污染物持续存在于培养环境中，轻者细胞生长缓慢，分裂象减少，细胞变得粗糙，轮廓增强，胞浆出现较多的颗粒；污染较重时，细胞增殖停止，分裂象消失，胞质中出现大量的堆积物，细胞变圆、脱落或崩解。 3．不同污染物对细胞的影响有差别。有的微生物如支原体，无致死毒性，可与细胞长期共存，但对细胞形态和功能有潜在影响。而病毒、细菌和霉菌的增殖迅速，能在短时间内在数量上压过细胞或产生有毒物杀死细胞。 污染物对细胞的影响可通过目测、显微镜观察、电镜观察、特殊染色鉴定、微生物培养实验、免疫学和分子生物学实验等。 支原体污染：是细胞培养中最常见、不易被察觉和干扰实验结果的一种污染。是细胞培养研究中重点预防对象。 （1）支原体生物学性状：一种介于细菌和病毒之间的目前所知能独立生活的最小微生物。可通过除菌滤器。 多形态性，光镜下难以看清其结构。 多吸附于细胞表面或散在细胞之间。 对青霉素普遍有抗药性。 （2）对细胞的影响：多数细胞受污染后，无明显变化，或有微细变化却由于传代和换液而被缓解。 污染细胞会受到多方面潜在的影响，如影响DNA合成，引起一系列严重后果（改变细胞染色体核型、增加染色体畸变、抑制PHA促淋巴细胞转化等）； 影响RNA合成； 抑制细胞合成干扰素，降低细胞抵抗力等。