高效液相色谱法测定微乳体系中胰岛素含量的前处理方法比较.pdfVIP

维普资讯 中圜兽 科 久 擎 学报 JournalofChinaPharmaceuticalUniversity 2004，35(4)：334～337 高效液相色谱法测定微乳体系中 胰岛素含量的前处理方法比较 余灯广，高秋华 ，胡锦东，陈 然 (华中科技大学药物研究所，武汉 430074) 摘【 要】 目的：研究反相高效液相色谱测定微乳体系中胰岛素含量的前处理方法，并对3种前处理方法 进行了比较．．方法：采用TritonX-100破乳、盐酸酸解、水饱和正丁醇萃取3种方法对胰岛素微乳体系进行前处 理，用RP_HPLC对处理后样品中胰岛素的含量进行测定。结果：Tritonx一100、酸解、萃取3种方法回收率分别为 98．7％～100．6％，94．1％ ～96-8％，89．2％ ～92．7％；RSD分 别 为 1．58％ ～3．20％，2．08％ ～4．30％，4．0r7％ ～ 6．09％ 结论：3种方法中，以Tritonx一100破乳法的结果较为精确，回收率较高；操作较为方便简单、快速可靠； 对胰岛素稳定性没有影响，样品消耗量较少。 关【键词】胰岛素；微乳；Tritonx一100；酸解；萃取；反相高效液相色谱 【中图分类号】 R927．2 文【献标识码】A 文【章编号】 1000—5048(2004)04-0334—40 微乳由于其中药物分散性好，利于吸收，可提高 分析手段，以胰岛素 口腔喷雾剂为研究对象，对上 药物的生物利用度；具有各向同性，热力学稳定，易 述 3种前处理方法进行了比较研究，从 中选择一 于制备和保存，有利于防止药物水解，能延长药物释 种 ，便于工业生产中质量的检测与控制及对制剂稳 药时间等特点，近年来作为药物载体的应用 日益广 定性方面的进一步深化研究。 泛。华中科技大学药物研究所研制的胰岛素口腔喷 1 仪器与材料 雾剂就是一个以大豆卵磷脂为乳化剂，粒径在 l10nn左右的w／o／w复合型亚微乳体系，相对生物 1．1 仪 器 利用度为29．2％l，现已进入Ⅲ期临床试验阶段。 Waters高效液相色谱仪：510泵，486紫外检测 该体系中主药胰岛素是由51个氨基酸和两条 器，WDL一95色谱工作站 (大连化物所)，20 l环形 多肽链组成的用于治疗糖尿病的一线蛋白类药物， 定量取样器。pHS一3C精密 pH计 (上海雷磁仪器 赋型剂除含大豆磷脂外还有多种其他物质，因此使 厂)，SB2200超声仪(上海必能信超声有限公司)。 得制剂中主药含量测定的难度较大。该药研制过 1．2 试 药 程中朱玉山等 j先用等电点沉淀、高速离心及溶剂 胰岛素 口腔喷雾剂及相关辅料 由华中科技大 萃取等多种方法相结合来分离提纯胰岛素，再用双 学药物研究所提供；色谱级乙腈 (美国Fisher公 缩脲法测定胰岛素含量，操作繁琐且回收率低。盛 司)；胰岛素(徐州生化厂，26．8IU／mg)；Tritonx一100 希群[]采用水饱和正丁醇萃取油相物质，然后进行 (分析纯，Amresco公司)；其余试剂均为国产分析 RP—HPLC分析的方法，操作亦比较繁琐且萃取条件 纯，水为双蒸水。 不易控制。关于微乳体系中蛋 白质类药物含量测 2 实验方法 定的文献不多，测定前处理的方法最主要有溶剂萃 取法 、酸解法[]、表面活性剂破乳法 j等，这些方 2．1 色谱条件 法本质都是对乳剂中的油相进行破坏，以释放其中 色谱柱：HypersilODSz，250otni×4．6otni，5tun 包裹、镶嵌及吸附的药物分子进行分析。本实验在