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实验九 紫外分光光度法测定 核酸的含量 一 实验原理 核酸、核苷酸及其衍生物都具有共轭双键系统，能吸收紫外光。RNA和DNA的紫外吸收高峰在A260nm波长处。一般在A260nm波长下，每ml含1μgRNA溶液的光吸收值为0.022。所以测定未知浓度RNA溶液A260nm波长的光吸收值即可计算出其中核酸的含量。 二 实验操作 1. 称取核酸样品0.05g——加入2ml左右的DW溶解（可在水浴锅上加热促其溶解）——然后用玻璃棒蘸取稀氨水调节pH到7——使用pH试纸调节——调好后将样品液定容到5ml（使用10ml量筒定容） 2. 取2支离心管，按下表加样——振荡均匀——在冰箱中冷却30min——然后离心15min,V=8000 3. 上清液稀释100倍： 用移液管从离心管中移取0.5ml上清液置于量筒中——用DW定容到50ml——倒入小烧杯搅拌均匀——然后用紫外分光光度计测OD260nm值A1,A2 4. 计算： RNA％＝ (A1-A2) / 0.022 / 50 ×100 * 2ml 2ml 样品液 -- 2ml DW 沉淀剂 离心管号 2ml -- 2 1 *
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