表达猪传染性胃肠炎病毒S基因的重组乳酸乳球菌的构建及免疫原性分析.pdfVIP

卷 期 ! # 微 生 物 学 报 !（）： # %!$ %!! 年 月 日 #$$ ! ! !#$ %’()(*(+$ ,-$ ! ’()*+ #$$ !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 表达猪传染性胃肠炎病毒 基因的重组乳酸乳球菌 ! 的构建及免疫原性分析 唐丽杰，欧 笛，葛俊伟，徐义刚，李一经 （东北农业大学动物医学院 哈尔滨 ,2$$%$ ） 摘 要：根据猪传染性胃肠炎病毒纤突（）蛋白的全基因序列及表达载体质粒的基因融合特点，设计一对引物，进 B 行 扩增，获得含有 基因 个主要抗原位点的约 的目的片段，将其与分泌表达的载体质粒 CDE -F4G B ! #$$$H( 进行连接，通过电击转化进入宿主菌乳酸乳球菌 细胞内，在乳链菌肽（ ）的诱导下进行表达，通 (IJ/,,# IJ3$$$ I*K*9 过BLB1C’F4 和M.KA.)9 H+=A 分析，表明-F4G B 蛋白在乳酸乳球菌中获得表达，所表达的-F4G B 蛋白具有与-F4 病毒一样的抗原特异性。间接免疫荧光试验表明重组菌表达蛋白定位于菌体表面。将表达-F4G B 蛋白的重组乳 酸乳球菌及空质粒菌株分别口服免疫 N’ONP ? 小鼠，收集粪便样品进行抗体检测，结果表明分泌型的重组菌 (IJ/,,#1B6P IJ3$$$ 免疫小鼠能够产生明显的抗-F4G KQ:’ 抗体。 关键词： 蛋白；乳酸乳球菌；表面表达；免疫原性分析 -F4G B 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） R3%% ’ $$$,10#$3 #$$ $#1$%!$1$2 猪传染性胃肠炎（ ， 本研究以 起主要免疫保护作用的囊膜蛋白基 -)69K5*KK*H+. :6KA)=.9A.)*A*K -F4G ）是 由冠状病毒科猪传染性 胃肠炎病毒 因（基因）主要抗原位点片段 插入到乳酸菌表 -F4 B B6 （ ， ）引起的以仔 达载体，构建了表达 蛋白的重组乳酸菌表 -)69K5*KK*H+. :6KA)=.9A.)*A*K S*)TK -F4G -F4G B 猪呕吐、严重腹泻和高致死率为特征的消化道传染 达系统，以期获得-F4G 口服活菌疫苗，依靠乳酸菌 ［］ 病, 。该病是我国及世界各养猪国家仔猪早期死亡 天然的抗菌抗腹泻作用和B 蛋白刺激的特异性黏膜