氟对体外培养人牙乳头间充质细胞合成I型胶原的影响.pdfVIP

氟对体外培养人牙乳头间充质细胞 合成I 型胶原的影响 * 郝玉庆 苗燕 楚金普 周学东 口腔生物医学工程教育部重点实验室，成都（610041 ） hyqluxi@126.com 摘 要：目的 研究氟对体外培养人牙乳头间充质细胞合成 I 型胶原的影响。方法 体外培 养人牙乳头间充质细胞，不同浓度氟（ 0.0g/L 、0.2 ×10-6 g/L 、 1.0 ×10-6 g/L 、5.0 × -6 -6 10 g/L 、25 ×10 g/L ）处理细胞，免疫细胞化学染色，图象分析氟对细胞合成 I 型胶原的影响。 结果 免疫细胞化学染色结果显示，所有实验组细胞均有 I 型 胶原棕黄色着色，图象分析显示，各组间着色无统计学差异。 结论 人牙乳头 细胞 I 型胶原合成可能对氟不敏感。 关键词：氟 人牙乳头间充质细胞 I 型胶原 中图分类号：R780.2 牙胚发育过程中，摄入过量氟可造成牙釉质、牙本质矿化异常。氟对牙釉质损伤机制之 一是氟影响釉基质蛋白代谢。氟对牙本质损伤的机制尚不清楚。牙本质基质主要由 I型胶原 组成，前期研究发现[1]，氟中毒牙本质基质内 I 型胶原分布异常，可见成牙本质细胞内胶原 聚集，近髓牙本质基质 I 型胶原浓染。牙本质基质和成牙本质细胞这种异常改变是否因为氟 影响了细胞合成功能尚不能肯定。由于目前技术原因，体外很难对成牙本质细胞长期培养， 现有研究多采用牙髓细胞或牙乳头细胞体外培养建立成牙本质细胞研究模型。为了进一步明 确氟对成牙本质细胞功能的影响，本实验对人牙乳头间充质细胞体外培养，采用免疫细胞化 学方法研究氟对细胞合成 I 型胶原的影响。 1.材料和方法 1.1 主要试剂和仪器 分析纯氟化钠（NaF），天津市化学试剂三厂。 兔抗人 I 型胶原多克隆抗体，武汉博士德生物工程有限公司。 DMEM 培养液，美国 GIBCO 公司产品。 免疫组化 SABC 试剂盒，美国 ZYMED 公司。 胎牛血清，浙江金华清湖犊牛利用研究所生产。 胰蛋白酶，美国 GIBCO 公司产品。 CO2 细胞培养箱，Formo Scientific 公司产品。 YJ-875 型超净工作台，苏州净化设备厂生产。 本课题得到教育部博士点科研基金（项目编号：20030610052 ）资助，*通讯作者 1 1.2 方法 1.2.1 标本制备 取对数生长期第 5 代人牙乳头细胞，2.5g/L 胰酶消化，加入 100ml/L胎牛血清 DMEM 培 养液，制备细胞悬液。以 5×104 个/mL 细胞浓度接种于预先放有盖玻片的 24 孔培养板内， 每孔 0.5ml,标准环境培养 24h，换20ml/L 胎牛血清 DMEM 培养液适应 12h，将 NaF 以 0.0g/L、 -6 -6 -6 -6 0.2×10 g/L、1.0×10 g/L、5.0×10 g/L、25.0×10 g/L、终浓度加入培养液，每组 6 孔， 继续培养 48h，取出细胞爬片，立即 0.01mol/L PBS 洗 1min×3次，40g/L 多聚甲醛-磷酸盐 缓冲液 40 0 C 固定 1h,置-20 C 2W 内备用。 1.2.2 实验步骤 固定的细胞爬片用新鲜配置 0.5%H O /甲醇室温处理 30min 以灭活内源性过氧化物酶。 2 2 双蒸水洗