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薄情.…‘HERE粤TAS(Beijing),2(3):34-361990
间期细胞原位杂交进行产前诊断的研究*
I.用Y3.探‘针探讨该方法可行性
沈光平 孙永明 曾伟强 周宪庭
(中国科学院遗传研究所,北京)
本文探讨用原位杂交方法产前诊断染色体数目异常先天性疾病的可能性。本实验用,4.探针与正
常男性和女性的外周血淋巴细胞以及冲洗早孕妇子宫颈及子宫得到的细胞进行原位杂交。经放射自显
影后结果表明,在男性细胞中有杂交点的间期细胞数目显著高于在女性中的数目,p0.005。从而证实
了该方法可用于染色体数目异常如21一三体综合症的产前诊断。
关键词:原位杂交,间期细胞,产前诊断,探针
遗传咨询,产前诊断和选择性流产是目前 近年来,不提取DNA,直接在胎儿细胞中
预防遗传病患儿出生的重要手段。常规的方法 原位杂交进行产前诊断的研究已经展开。[2,101本
是通过绒毛取样或羊膜腔穿刺获得少量胎儿细 实验目的是用Y34特异探针在间期细胞内进行
胞,培养制片,分析中期染色体。该方法费时费 原位杂交,以探讨用该方法对染色体数自异常
力,需要掌握相当的技术,对孕妇及胎儿有一定 的先天性疾病进行产前诊断的可能性。
的危险性并有一定比例的假阳性或假阴性。同
材 料 和 方 法
时也无法诊断一些由于基因缺陷所致遗传病,
敌普遍推广受到了限制。据欧洲临床遗传学会 一()探针
统计,8%左右的孕妇需要进行产前诊断而实 本实验使用Y3.4特异探针1),是从Y染色体
际‘进行诊断的人数低于4%0 异染色质处分离的长3.4kb的重复序列,克隆
随着分子生物学的发展,自1979年首次用 在 PBR322的EcoRI酶切点的位置,该探针
珠蛋白基因探针成功地进行镰形细胞产前诊断 与男性DNA的亲合力比与女性DNA 亲合
以来,分子探针越来越广泛地用于遗传病及先 力高1000倍61〔0
天性疾病的产前诊断研究。这种方法只需要极 二()探针的标记
少量的实验材料,准确、灵敏。一般说来,对已 用缺口转移法把”P-dCTP(3000ci/mmol,
探明基因缺陷机制的疾病,如缺陷改变了限制 Amersham;InternationalPIC, c{i一3.7X
性内切酶切点的位置,可用内切酶消解 DNA 107becquerels)标记到y3.上‘,标记反应液共
后直接用探针杂交进行诊断;若缺陷没有改变 20rd 其中 dATPdGTP,dTTP各 1z11(0.4
切点位置,则可用合成小片断寡核昔酸作探针
进行DNA点杂交。对于基因缺陷尚未探明,未 ShenGuangpingetal.:StudyofPrenatalDia-
gnosiswithinSituHybridizationinInterphaseCells.
分离出致病基因的遗传病,可用邻近的单一序
I.StudyoftheFeasibilitywithY-刁Probe
列进行限制性酶切片断长度多态性 R(FLP)分 *本工作得到国家自然科学基金委员会资助。
本文于1988年 10月21日收到。
析0。13,5,111上述方法,均需提取被检对象之DNA :)该探针由医科院基础所王申五教授由国外引进并触
后方可进行. 送,在此致谢。
mmol/L),10XBuffer-2,u1,32P-dCTP31AI垒 12一16小时。
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