尿酸氧化酶基因的克隆、表达及其产物的应用.pdfVIP

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2017-09-03 发布于重庆
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尿酸氧化酶基因的克隆、表达及其产物的应用.pdf

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卷期生物工程学报 ! ! %’(!)(! 年月 #$$! ! !#$%%’()*$+,( .#(/%0$(,( *+,-+. #$$! - 12 / !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 尿酸氧化酶基因的克隆、表达及其产物的应用朱献军刘建国黎高翔（中国科学院微生物研究所北京） !$$$2$ 摘要克隆了产朊假丝酵母（）尿酸氧化酶（，，）的基因。 !+$3#3+)/#,#BC#D!! E.+F8G:=H+@8E.=A+@8;I!((4(4 将此基因插入原核表达质粒后转化大肠杆菌（），获得高表达的重组转化子菌株。经诱导， ;7#!+ KL#!M;4 NO7P J 重组尿酸酶基因表达量可达菌体可溶性蛋白的。重组尿酸氧化酶为有酶活性的可溶蛋白。印迹分析 1$Q R8@F8., 证实表达产物有免疫学活性。经纤维素离子交换柱层析纯化，目的蛋白纯度可达。重组蛋白和 M;B;M;6# 56Q 天然蛋白的理化特征比较证明重组蛋白的热稳定性有较大提高。酶盒配制和临床应用实验表明重组蛋白可代替天然蛋白进行临床血清尿酸的分析。关键词产朊假丝酵母，尿酸氧化酶，基因克隆和表达，尿酸分析中图分类号文献标识码文章编号（） S2 B !$$$04$3!#$$!$!0$$320$6 尿酸氧化酶（，）是生质粒（）［（）］和产朊假丝酵母 E.+F8G:=H+@8;I!((4(4 K’-8@A.=FUC KC UC J J J 物体内嘌呤降解代谢途径中的一种酶，能催化尿酸由本组保存。质粒购自 BC#D!! ;7#!+ )V8,8 J ? 氧化为尿囊素。许多物种中均发现有尿酸氧化酶存公司。在，但在高等哺乳动物（猿和人类）体内却缺乏有生 !!# 试剂和酶：寡核苷酸引物由上海生工公司合物活性的尿酸氧化酶，而以尿酸作为嘌呤代谢的终成。限制酶购自公司，其余工具酶和