人类双精子卵浆内注射三原核胚胎模型及其在原核亲缘性活体鉴定方面的应用.pdfVIP

人类双精子卵浆内注射三原核胚胎模型及其在原核 亲缘性活体鉴定方面的应用1 朱小明，徐晨明，钱羽力，张艳玲，金帆，黄荷凤 浙江大学医学院附属妇产科医院生殖内分泌科，杭州 (310006) E-mail：huanghefg@ 摘 要：本文报告人（卵浆内双精子注射受精）两性生殖方式三原核胚胎模型的创建效果， 以及用于推荐的人两性生殖方式原核亲缘性活体判别形态学标准（简称人原核亲缘性形态学 标准）的验证研究。在从辅助生殖临床获得捐赠的 108 个人未成熟卵和68 份正常精子悬液 后，先行未成熟卵体外成熟培养。在获得 89 个成熟卵后，再行卵浆内双精子注射。如此成 功构建了39 个三原核胚胎模型（构建成功率43.82% ）。然后依据三原核胚胎模型3 个原核 相对确认的亲缘性（2 个雄原核形态/ 大小相互匹配/一致、又相对远离第二极体；1 个雌 原核单独的、与其它原核形态/ 大小不匹配/不一致、又相对接近第二极体），先相对确认 该三原核胚胎模型原核的亲缘性，再验证推荐的人原核亲缘性形态学标准相应的判别准确 性。结果显示用推荐的人原核亲缘性形态学标准判别39 个标准的人三原核胚胎模型的原核 亲缘性，有35 个三原核胚胎模型的原核（70 个雄原核，35 个雌原核，占89.7% ）与三原核 胚胎模型的原核亲缘性完全符合。研究结论：1、人三原核胚胎模型用于人原核亲缘性形态 学标准的验证研究，简单、经济、可行、有效、新颖，是相关领域值得推荐的研究方法。2 、 推荐的人原核亲缘性形态学标准（即两性生殖原核期胚胎中相对较大且距 PB2 相对较远者 为雄原核；反之，则为雌原核）有明显的活体判别效果和自然优势，是相关领域简便、实用、 经济、可行的参照标准和操作规范。 关键词：人；原核；胚胎；模型；亲缘性；形态学；标准；卵浆内精子注射 中图分类号：R339.2 1．引言 真哺乳亚纲动物的生殖方式是两性生殖，没有自然的单性生殖。但是科学家对某些真哺 乳亚纲动物可实施人工诱导的单性生殖，在小鼠、猴已有相应的子代出生和/或干细胞研究 [1, 2] 成果 。 已建立的人工单性生殖有孤雌生殖（parthenogenesis ）、雌核发育（gynogenesis ）和雄 核发育（androgenesis ）3种方式。其中人工雌核发育或雄核发育多是通过对两性生殖方式受 精卵（原核期胚胎）的显微（重构）操作，先去除雄原核（male pronucleus, mPN ）或雌原 核（female pronucleus, fPN ），再追加移植相应的fPN或mPN实现的[3] 。如此在构建相应原核 期胚胎时需要具备对原核亲缘性（fPN或mPN ）的鉴别/认识能力。 [4-7]，但是这些确认方法多 目前人原核亲缘性可通过细胞遗传学或分子生物学方法确认 属非活体检测，在实施人原核期胚胎重构时不可行。新近有学者报告用荧光染料MitoTracker Red® （Molecular Probes, Eugene, OR, USA ）标记精子中段线粒体鞘，受精后活体判别雄原 核[8] ；但是该染料和荧光对受累胚胎的负面影响目前还不清楚，使其在人原核期胚胎重构的 使用有顾虑。在小鼠，有关原核形态学特征的亲缘性意义有零星报道[9, 10] ；但是有关人类原 核形态学特征的亲缘性意义没有专题研究报告，更没有相应的判别标准[5] 。 1本课题得到高等学校博士学科点专项科研基金（项目编号：20040008931 ）、国家自然科学基金面上项目 （项目编号）、国家863 项目（项目编号1022 ）和国家973 项目（项目 编号：2006CB504004 ）的资助。 -1- [9, 10] 依据人原核发育生物学的相