人纤溶酶原K1-3基因的克隆、表达和产物的纯化及抗癌活性分析.pdfVIP

卷 期 生 物 工 程 学 报 ! # ’() * ! +( *# 年 月 $%%$ !#$%% ’()*$+, (- .#(/%0$(,(12 ,-./-01-2 $%%$ !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 人纤溶酶原!#$ 基因的克隆、表达和产物的纯化及抗癌活性分析 张添元 罗进贤 陆幸妍 （中山大学基因工程教育部重点实验室，生物化学系，广州 #!%$5# ） 摘 要 纤溶酶原F!39 功能区是近年发现的血管生成抑制因子，具有抑制肿瘤生长和转移的活性。以人血管生 成抑制素 为模板用 技术扩增了 功能区的基因， 序列分析后克隆至质粒 上获得重组质 @G+H IJK F!39 G+H .ILJF 粒.ILJF!9，转化毕节酵母M,!!#，用IJK 和M4! 法筛选高拷贝转化子，进行摇瓶发酵。,G,3IHM= 和N-?/-2E 1)(/ 分析结果证实 基因已在 分泌表达，并具有免疫活性。选用 和 罐进行高密度发酵，甲醇诱导 F!39 M,!!# 9%O %O 4P 细胞密度达到 34$#% Q 9%%，比摇瓶提高# Q 6 倍，表达量!#%3$%%0RS O。发酵上清液经,/2-;0)E- ,I 离子交换及IP-3 ET)3,-.P(2(?- 疏水层析纯化，在,G,3IHM= 上显示一条带，纯度6 U ，动物实验证明纯化产物具有抗血管生成和抗肿 瘤的活性。 关键词 人纤溶酶原F!39，基因克隆和表达，纯化，抗癌活性 中图分类号 文献标识码 文章编号 （ ） V5 H !%%%39%6! $%%$ %#3%#93%4 血管生成是肿瘤组织得以快速生长和转移的基 赤酵母 5#0#+ 6+/(*# M,!!# 及 .ILJF 购自LEZ/2(3 ［］ ! 础 。利用高效低毒的血管生成抑制因子抑制新生 R-E 公司。 血管的形成，切断肿瘤的营养供应，达到治疗肿瘤的 酶和主要试剂：限制酶， 连接酶， % % 84 G+H ［ ］ 目的是当前肿瘤领域研究的热点之一$ Q 9 。!4 年 ， 试剂盒购自 公司，人纤溶酶原抗 D+8I? IJK K(@P- 发现的纤溶酶原的F!34 功能区是一个血管生成抑制 血清为 公司产品， 引物由北京赛百盛公 ,R0; IJK 因子，它通过抑制血管生成来抑制肿瘤的生长和转 司合成，纯化用的 ， 等