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158 广东农业科学 年第 期
2009 5
多位点基因打靶的定点整合效率研究
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王克振 ， 蒋 泓 ， 唐冬生 ， 曾 芳， 梁沂梅 ， 李月琴 ， 周天鸿
（ 暨南大学生命科学技术学院，广东 广州 ； 佛山科学技术学院医学院，广东 佛山 ）
1. 510632 2. 528000
摘 要：利用PCR 方法从pEGFP-N1 中扩增pCMV-EGFP ，从人基因组rDNA 基因家族靶基因插入位点两侧分别扩增
两条基因打靶同源重组引导序列DS1 和DS2 ，将DS1 、DS2 片段插入pMD19-pCMV-EGFP 中，构建成多位点基因打靶载体
pMD19-DS2-pCMV-EGFP-DS1 。 通过脂质体将其转染至HEK293 细胞内。 通过荧光检测和PCR 、测序等方法，检测和评价
定点整合效率。 试验结果表明，外源基因 在转染细胞中持续稳定表达， 定点整合率约为 ，不经药物筛选大
EGFP EGFP 4%
大提高了整合效率，比传统的基因打靶技术提高了4000 多倍，为转基因动物研究建立了高效的定点转基因技术。
关键词：基因打靶；多位点；定点整合；HEK293 细胞
中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ）
Q784 A 1004－874X 2009 05－0158-04
Research on the targeted integration efficiency of
gene targeting of multiple sites
1 2 2 2 2 1 1
WANG Ke-zhen , JIANG Hong , TANG Dong-sheng , ZENG Fang , LIANG Yi-mei , LI Yue-qin , ZHOU Tian-hong
(1. College of Life Science and Technology, Jinan University, Guangzhou 510632, China
2. Medical College of Foshan University, Foshan 528000, China; )
Abstract: The pCMV-EGFP gene was
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