非同位素PCR-SSCP方法的初步临床应用PreliminarilyClinicalApplicationofNon-isotopePCR-SS.pdfVIP

遗传HEREDITAS(Beijing)17(4):4-71995 ·研 究 报 告 · 非同位素PCR-SSCP方法的 初步临床应用① 毛 新② 黄明生 牟庶华 曾 仲 华（西医科大学精神科遗传室，成都610041) 成（都市第三人民医院神经内科，成都610000) 杨 光 华 赵 坡 华（西医科大学病理科，成都610041) 军（事医学科学院放射医学研究所，北京 100850) 摘 要 单链构象多态性检测法P（CR-SSCP)是近年发展起来的一项检测人类基因组突变的新技术．然 而，在该技术中需要使用放射性同位素标记的核昔酸或引物，从而限制了其广泛临床研究及诊断方面的 应用．本文报告一种改进的PCR-SSCP方法，该方法不用同位素标记引物，而直接在浪乙咙染色的聚 丙烯酞胺凝胶上显示SSCP.用该方法对55例平滑肌肉瘤砂3基因第7外显子突变的检测表明，38% 的瘤组织DNA存在异常的SSCP.其中10例有HaeIII和Ms可酶切位点的突变 1（8%),19例有突变型 p53蛋白的过度表达9（例同时有异常SSCP改变）．而p53质粒DNA，平滑肌瘤及Alzheimer病患者基 因组DNA无沁3基因第7外显子扩增片段的异常SSCP改变．同时，还使用该方法对临床诊断的20 例Alzheimer病患者和8例健康对照进行了 卜淀粉样蛋白前体基因第 16和17外显子的扩增及分析， 均未发现有异常 SSCP改变及 EcoRI,Bc1I酶切位点的突变．本研究结果提示，该非同位素 PCR-SSCP方法可靠、敏感、简便、快速，具有潜在的推广价值． 关键词 非同位素,PCR-SSCP,平滑肌肉瘤，Alzheimer病 PreliminarilyClinicalApplicationofNon-isotopePCR-SSCP MaoXin* HuangMingsheng MuShunhua (DivisionofMedicalGenetics,DepartmentofPsychiatry,WestChinaUniversityofMedicalSciences,Chengdu610041) YangGuanghua (DepartmentofPathology,WestChinaUniversityofMedicalSciences,Chengdu610041) ZengZhong (DepartmentofNeurology,No.3PeoplesHospital,Chengdu610000) Zhao Po (DepartmentofPathology,InstituteofRadiationMedicine,Beijing100850) ①国家自然科学基金，国家教委博士学科点专顶科研基金资助课题． ②现在工作地址：英国伦敦帝国癌症研究基金会，人类细胞遗传学实验室，伦敦． OPresentAddress:HumanCytogeneticsLaboratory,ImperialCancerResearchFund,P.O.BOX123,LincolnsInj Fields44,LondonWC2A3PX,U.K. 4期 毛 新等：非同位素PCR-SSCP方法的初步临床应用 5 单链构象多态性检测法(P（CR-SSCP)是近年发展进来的一项检测PCR产物微小DNA序列 改变的方法．自1989年首次报告以来 4)〔，该技术已广泛用于癌基因、抑癌基因和遗传病相关突 变的检测。然而，经典的PCR-SSCP需要使用放射性同位素标记的核昔酸或引物 ，〕〔，这样就限 制了该技术在临床基层医院对肿瘤和遗传病检测及