重组人谷氧还蛋白1在大肠杆菌中表达条件的优化、纯化及活性检测.pdfVIP

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维普资讯 第 10卷 第 3期 生 命 科 学 研 究 、0l_10No 3 2006,十9月 “ ScdenceResearch Sep.2006 重组人谷氧还蛋白1在大肠杆菌中表达条件的 优化、纯化及活性检测 刘莹莹,邹朝霞,周宏博,吴莉芳,房绍红 (哈尔滨医科大学 生物化学与分子生物学教研室,中国黑龙江 哈尔滨 150086) 摘 要:为进一步研究谷氧还蛋 白 1(Grx1)的生物学功能及作用机制,将 已构建的 pRSETA—Grxl融合蛋 白表达 载体在大肠杆菌 BL21(DE3)菌株 中表达 ,并优化表达条件 ,用 SDS—PAGE和凝胶影像分析 .结果表 明,当茵体 密度 ODooo为 1.0时开始诱导 ,加入终浓度 0.5mmol/LI G,37cc,110±5r/rain振 荡培养 5h,重组蛋 白为 可溶性 ,表达量达30%以上 .用Ni—NTA树脂亲和层析纯化重组蛋 白,获得蛋 白质纯度达90%以上 ;westem 印 迹结果表 明,该蛋 白具有免疫活性 ;Mrr结果显示,终浓度为 10mg/LGrxl重组蛋 白具有保护细胞抵御 500 LLmol/LH2O2作用 (PO.01). 关键词 :pRSETA.Grx1;表达条件优化:纯化 中图分类号 :Q782 文献标识码 :A 文章编号 :1007.7847(2006)03—0228—05 TheOptimizationofExpressionCondition,PurificationandActivity Analysisof Recombination HumanGlutaredoxin1in E.coli LIUYing—ying,Z0U Chao—xia,ZHOU Hong—bo,WU Li—fang,FANG Shao—hong (DepartmentofBiochemist~andMolecularBiolog).HarbinMedicalUniversit),Harbin150086,Heilong]iang,China1 Abstract:In ordertostudythebiologicalfunctionand mechanism OIhumanGrx1further,therecombinant plasmidpRSETA—Grxl(rhGrx1)constructedbyourgrouppreviouslyweretransformedintothehostE.coli BL21(DE3),andtheexpressionconditionofrhGrx1wereoptimizedinthistest.WhenrhGrx1expressionwas inducedatOD6ooof1.0with0.5mmol/LIPTG for5hat37。=【withtheshakingspeedof110±5r/min.the maximum amountsofsolubleproteinswereobtainedandtheyieldwasmorethan30% ofthetotalmassof bacterialproteins.Then,therecombinantproteinswerepurifiedbyNi—NTA resinandproteinamountswele‘ morethan90% .ThewesternblottingindicatedthattherhGrx1proteinexpressedtheimmunologicalactM ty. Inaddition.M1TrassayshowedthatrhGrxlproteinhadantioxidantfunction. Keywords:pRSETA—Grxl;theoptimizationofexpressionc

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