皖南尖吻蝮蛇毒糖甙水解酶(NADase)的荧光光谱研究.pdfVIP

维普资讯 无 机 化 学 学 报 V01．14，NO．1 JoURNALOF INoRGANIC CHEM ISTRY March．1998 ’ 皖南尖吻蝮蛇毒糖甙水解酶(NADase)的荧光光谱研究 ／ 第 刘清亮 吴双顶 余华明 张祖德 一 (中国科学技术大学化学系，合肥 ，230026) ．R 月 丁 兰 ~／ ● _ I _ _ ’ -- - - ● 一 (长春应用化学研究所希土化学与物理开放实验室，长春，130022) 本文用荧光光谱法研究了皖南尖吻蝮蛇毒糖苷水解酶 (NADase)的性质。在 pH,~6时，pH对 NADase的荧光强度影响较大，而在 pH6，pH对NADase的荧光强度几乎没有什么影响，cu 的加 入可引起NADase的内源荧光强度的降低．通过荧光滴定测得 cu：与NADase结合常数 EM为 5．3 ×10。(otol／L)_。。I一对NADase发光的淬灭作用很小．I-浓度为 0．1mol／L和 0．2mol／L时仅分别能 淬灭为原来的 l 和 3 ，但在 lmmol／LEDTA存在情况下，I一对NADase发光的淬灭作用非常显 著，I一浓度为0．1mol／L和0．2mol／L时淬灭分别为原来的25％和 48％，因此cu 对维持NADase 结构起重要作用 。 关键词： 蝮蛇毒恼苷水解酶 酸度 铜离子 碘离子 ：荧光光谱 — 一。～ ^ 姚毒 蛇毒是一种广泛的酶源，近年来蛇毒的研究在神经生物学、免疫学、医学上已有很大进展。 对蛇毒的研究已不再局限于分离纯化和一般理化性质 ，很多研究工作 已深入到蛋白质结构和 功能的相关性。了解蛇毒组分的结构和功能之间的关系，是最终利用蛇毒资源的基础。糖苷水 解酶 (NADase)广泛存在于许多微生物、动物的各种组织和毒液中，能催化水解NAD为等摩尔 的尼克酰胺和腺嘌呤二磷酸核糖 。早在 1975年 Tatsuki等就报道 了从蛇毒中提取NADaseE。 后来Yost和Anderson又进一步从B．Fasciatus纯化了NADase，并作了一些研究 ]。黄婉治等也 从皖南尖吻蝮蛇 (AgkistrondonAcutus)蛇毒提纯得到NADase，并对其理化性质及功能进行 了研 究，表 明cu 起催化活性和稳定构象的作用[3]。我们对皖南尖吻蝮蛇毒NADase中cu+的周 围配位结构作了研究，cu 结合部位为三个组氨酸咪唑N和另一个N原子或 O原子组成非轴 对称的配位平面[5]。 本文报道了用荧光光谱法研究皖南尖吻蝮蛇毒NADase的溶液构象及其 cu+对它的影 响。 1 材料和方法 1．1 皖南尖吻蝮蛇粗毒，安徽省祁门蛇伤所提供 。参照黄婉治等人的方法 。分离纯化得 收稿 日期：1997一Ol一03。 收修改稿 日期：1