小麦类脱水素的表达_纯化及多克隆抗体的制备.pdfVIP

Research Papers 研究报告 生物化学与生物物理进展 ProgressinBiochemistryandBiophysics 2007,34(9):960~964 小麦类脱水素的表达、纯化及多克隆抗体的制备* ** 杨 颖 张林生 张晓娟 山 仑 西北农林科技大学生命科学学院，黄土高原土壤侵蚀与旱地农业国家重点实验室，杨凌 ( 712100) 摘要 脱水素在胚胎发育后期累积，外源脱落酸 、低温、干旱和其他一些环境条件下能诱导脱水素的产生，尽管植物 (ABA) . 在脱水条件下脱水素广泛存在于细胞中，但其生化功能仍不清楚 为研究小麦在不同时期脱水素基因的表达情况和生物学功 RNA RT-PCR (W ZY1-1) 能及抗体制备，以小麦幼芽为材料，经干旱胁迫处理后，提取总 ，通过 得到小麦类脱水素基因片段 ， 再连接至克隆载体PUCM -T，并成功构建重组表达质粒PET-32a(+)-wzy1-1，将阳性重组质粒转化于受体菌BL21(DE3)感受态 IPTG (SDS) . 37ku 细胞中，经 诱导表达，进行表达产物的聚丙烯酰胺凝胶电泳 检测 结果表明，表达蛋白位于 处，小 2+ . Ni 麦类脱水素基因获得高效表达 表达蛋白经 琼脂糖凝胶亲和层析和透析袋电洗脱法纯化后，对兔子进行免疫，制备的抗 血清通过 检测到较高的多克隆抗体效价 蛋白质印迹结果显示，利用纯化的蛋白质制备的兔抗血清可以很好地和所表 ELISA . 1 SDS 达的蛋白质带特异性结合，且郑引 号小麦幼苗进行干旱处理，提取粗蛋白， ，蛋白质印迹检测显示，在分子质 量28ku处出现特异的蛋白质条带，这说明所制备的抗血清可以与小麦叶片所表达的dehydrin蛋白特异性结合，证明其具有 良好的免疫原性. 关键词 脱水素蛋白，原核表达，多克隆抗体制备 学科分类号Q78 干旱是限制农业生产的一个重要环境因素，干 本研究在利用基因工程手段获得了小麦类脱水 . 素基因，将该基因连接到构建的融合表达载体上， 旱影响植物生长发育，造成作物的严重减产 现在 有关干旱的研究主要集中在生理方面，如一些指标 在大肠杆菌中表达，利用纯化的重组蛋白免疫兔 的测定，而从分子水平方面对抗旱基因的研究比较 子，制备了小麦类dehydrin 的多克隆抗体，利用此 少 人们通过对种子不同发育阶段的研究发现，随 抗体对水分胁迫下小麦表达的类脱水素进行检测， . 种子发育后期产生一些小分子特异多肽，即胚胎发 从分子水平为研究小麦耐旱机理奠定了基础. 育后期丰富蛋白 (late embryogenesis abundant 1 材料与方法