第二十六章病毒感染的诊断.pptVIP

第二十六章 病毒感染的诊断 第四节 检测病毒核酸 核酸分子杂交技术 PCR * * 第一节 检测病毒 1、病毒的分离培养 （1）采集样品的时间与部位： 1）发病的早期，尤其是抗病毒治疗前； 2）血液、脑脊液分离病毒诊断意义较大；呼吸道、 胃肠道、泌尿生殖道、创口或皮肤分离的病毒 必须结合临床资料的分析； 3）呼吸道病毒感染采集鼻咽分泌物、脑脊液用于 分离神经系统感染的病毒、消化系统感染的病 毒采集粪便、血液传播病毒采集血液。 （2）样品的采集、处理和运输： 1）用无菌棉拭子收集样品； 2）病毒分离前加入抗菌素； 3）缩短运输的时间、注意运输过程中的温度。 （3）分离培养 1）细胞培养 2）实验动物 3）鸡胚接种 （4）鉴定 1）病毒种类与型别鉴定： 已知特异性抗血清，通过免疫学方法如 IFA、ELISA、中和试验等对分离培养的 病毒进行种型鉴定； 病毒在细胞内增殖的指标 1、CPE 正常细胞 病变细胞 2）病毒传染性测定： TCID50：tissue culture infective dose 50， 50%组织细胞感染量； 蚀斑测定：plaque assay，pfu（plaque forming unit） 2、病毒的形态学检查 （1）光学显微镜，如包涵体的观察（inclusion body）； （2）电子显微镜，用于发现一些新的病毒，如引起腹 泻的轮状病毒和Norwalk病毒等； 免疫电镜技术（immune electron microscope）用于提高检测的敏感 性，如HAV的检测。 第二节 检测病毒抗原 病毒抗原的检测 （1）IFA和IHC：通常是已知抗体去检测抗原； （2）反向被动血凝试验； （3）对流免疫电泳； （4）放射免疫测定法； （5）ELISA； （6）时间分辨荧光测量技术； （7）斑点-酶免疫与Western blot； 1 2 3 免疫组织化学染色 Western blot 第三节 检测病毒抗体 1、病毒抗体的种类：IgG、IgM、IgA和IgE。 2、检测抗体的方法 （1）中和试验：特异性的抗病毒免疫血清（中和抗体） 与病毒作用，能抑制病毒对敏感细胞 的吸附、穿入，从而阻止病毒的增殖， 使其失去感染力。 （2）血凝抑制试验 （3）补体结合试验 （4）间接血凝试验 （5）乳胶凝集试验 （6）ELISA *