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AB SCIEX QTRAP® 串联质谱系统用于食品中过敏原的检测 AB SCIEX QTRAP®串联质谱系统用于食品中过敏原的检测 背景 全球食物过敏患病率日益升高，对提高过敏原筛查方法的需求也越来越高。以美国为例，已经发现有约 6%的儿童和3.7%的成人存在食物过敏反应，而且报告显示这个数目还在不断上升。过敏原有着各种不同的 来源，既包括来自于荞麦、蛋、花生、带麸质的谷物制品、坚果、甲壳动物、鱼、大豆、芝麻、芥末和芹菜 等食物的蛋白，也包括带有亚硫酸盐等化学品的食物。食用含过敏原的食物后，过敏原就会进入血液，引发 人体的免疫应答，导致各种过敏反应，包括从轻度皮疹和恶心到过敏性休克或严重过敏反应。根据统计，在 年间，英国发生了 起因食物过敏而死亡的事故。当前，最有效的治疗食物过敏的办法就是避免 1999-2006 48 进食含过敏原的食物，或者是用肾上腺素进行治疗。 为了保护消费者的健康，从世界各地的食品生产厂家到政府官员都认为，需要改进用于检测和定量各类食 品中潜在的有害过敏原的检测方法。近期一些国家将有新的法规发布，其中对食品中过敏原的含量做了明确的 规定。这对公共健康部门和食品企业采取主动行动是至关重要的。 在此LC- MS/ MS过敏原方法问世之前，筛查食品中过敏原的传统方法采用酶联免疫吸附测定方法 （ ），该方法利用特异性抗体来检测过敏食品中的特有蛋白质 。采用该方法进行定性和定量分析常 ELISA 3, 6 会产生不同的结果，以及假阳性和假阴性的结果，因此该方法存在严重的局限性；此外，每一个目标过敏原都 需要一种单独的 试剂盒。另一种方法则为实时聚合酶链式反应 （ ）方法，这种间接分析方法的缺点 ELASA PCR 在于仅能够检测出过敏原生物体物质的存在，而不能直接检测过敏原，从而产生假阳性和假阴性结果。因此， 开发一种能够准确地、同时监测多个过敏原蛋白质的方法，对于食品中过敏原的筛查是非常有意义的。 本文介绍了新近开发出的一种针对食物中过敏原的快速，可靠，灵敏而且特异性高的LC-MS/ MS检测方 法。采用这一方法，样品经简单的均一化、胰蛋白酶酶解及 简单净化后， 检测，即可同时检测 SPE LC-MS/ MS 四种主要过敏食品来源，即花生，牛奶，小麦和鸡蛋中低ppm级水平的过敏原肽段。目前，该过敏原检测方 法已经通过验证，成为AB SCIEX应用广泛的Cliquid™食品安全平台iMethod应用方法包的必威体育精装版成员。实验证 明，该LC-MS/ MS技术可有效简化和降低在下一代食品过敏原分析中的分析成本，不仅同时直接检测多种过敏 原中的致敏蛋白，还能提供高可信度和具体的定量结果。 解决方案 实验 标准品 方法开发过程中，一些已经有商品化产品的目标过敏原通过直接购买获得。而对那些无法直接获得的过敏 原，则通过购买一些未经处理的食品 （如花生） ，然后提取其过敏原，用于方法开发。 9 样品前处理 采用食品处理器对待测样品 （面包或意大利面）匀浆，然后在样品中添加已知量的过敏原蛋白，得出加 标样品。将 粉末状加标样品与含有碳酸氢铵、尿素和二硫苏糖醇的提取缓冲液混合。使用旋转混合器、 5 g 通过震摇和搅拌使其充分混合。 混合物进行离心后，取1mL上层清液与碘乙酰胺溶液混合，避光孵育20 min，再加入含有碳酸氢铵，乙腈 和胰蛋白酶的混合消化缓冲液进行酶解。在 ℃下温浴下过夜，然后进行酸化和过滤。 37 滤液采用按通常条件平衡过的 聚合物 柱进行纯化。使用乙腈将肽段从 柱上洗脱提 Phenomenex SPE SPE 取，提取物浓缩蒸干后，再使用酸化乙腈进行复溶。