兴安、长白及华北落叶松RAPD分子标记的物种特异性鉴定.pdfVIP

植物学通报Chinese Bulletin of Botany 2007, 24 (4): 498504, .技术与方法. 兴安、长白及华北落叶松RA P D 分子标记的 物种特异性鉴定 1 2* 2 曲丽娜 , 王秋玉 , 杨传平 1 大庆师范学院, 大庆 163454 ; 2 东北林业大学, 哈尔滨 150040 摘要 以中国北方地区主要乡土落叶松树种兴安落叶松(Larix gmelini)、长白落叶松(L. olgensis)和华北落叶松(L. principis- rupprechtii)的针叶及种子胚乳为研究材料, 采用RAPD分子标记技术对3种落叶松进行不同物种的种间鉴别。结果表明, 通过 引物筛选得到了4个可以鉴别3种落叶松的RAPD引物, 其中有2个引物在落叶松针叶和种子胚乳基因组中都扩增出相同的条 带。引物OPB- 11在兴安和长白落叶松基因组DNA 中1 500 bp处扩增出特异条带, 而在华北落叶松中没有; 引物OPX- 14在兴 安落叶松基因组DNA 中1 200 bp处扩增出特异条带, 而在长白落叶松中没有; 还有2个引物可分别作为3种落叶松苗木和种子 鉴别的辅助标记。本研究从分子水平上为落叶松的种间鉴别提供了新的鉴定方法。 关键词 兴安落叶松, 长白落叶松, 华北落叶松, RA PD标记, 物种特异性鉴定 曲丽娜, 王秋玉, 杨传平 (2007) . 兴安、长白及华北落叶松RA PD 分子标记的物种特异性鉴定. 植物学通报 24 , 4 98 504 . 兴安落叶松( L a r i x g m e l i n i ) 、长白落叶松( L . DNA和胚乳单倍体基因组DNA分别进行了RA PD-PCR olgensis)及华北落叶松(L. principis-rupprechtii)是我国 扩增, 目的是寻找各落叶松物种的特异性DNA片段, 为 北方重要的造林用材树种。兴安落叶松主要分布在我 鉴别3 种落叶松提供简单又准确的分子标记。 国黑龙江省的大、小兴安岭; 长白落叶松主要分布于黑 龙江省东南部, 吉林东部长白山地区以及辽宁省; 华北落 1 材料与方法 叶松产于河北和山西2 省, 分布在北京百花山、灵山及 河北小五台山(海拔2 000-2 500 m) 、河北围场、承 1.1 实验材料 德雾灵山(海拔1 400-1 800 m)、山西五台山、恒山 针叶材料来自东北林业大学帽儿山实验林场30年生落 (海拔1 800-2 800 m)等高山地带(胡新生和王笑山, 叶松种间对比试验林, 每个物种随机选择10个样本, 分 1999) 。这3种落叶松的幼苗及种子外部形态极其相似, 别采集针叶并装袋登记, 冷冻保存。种子材料来自不同 单凭肉眼很难区分, 给落叶松种子的收购、经营和调配 地区: 兴安落叶松(Larix gmelini)种子来自黑龙江省乌伊 带来很大困难。而林业生产中用种出现问题将会在经 岭林业局, 长白落叶松(L. olgensis)种子来自黑龙江省小 济上造成巨大损失。为了解决落叶松属种子的鉴别问 北湖和白刀山林业局, 华北落叶松( L . p r i n c i p i s - 题, 许多林业工作者进行了大量的研究(程凤琴和周铁程, rupprechtii)种子来自北京市林业局, 每个物种随机选择 1994; 弓彩霞和乔辰,1994; 王建中和王瑞勤,1994; 杨茜 50 粒种子组成样本群体。 和乔辰, 1995, 2005; 于海中等,1999), 但鉴别结果都不 理想 。 1.2 实验方法 本文采用4 7 个RA PD 随机引物先后对兴安落叶 1.2 .1 种子的处理 松、长白落叶松以及华北落叶松的针叶二倍体基因组 选择饱满的种子, 在温度为28°C、相对湿度80% 以上 收稿日期: 2006-07- 19