pdf - 家蚕溶茧酶基因的克隆序列分析及原核表达.pdfVIP

中国农业科学 2008,41(10):3277-3285 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.047 家蚕溶茧酶基因的克隆、序列分析及原核表达 1 3 1,2 1 1,2 吴玉丹 ，王文兵 ，李 兵 ，王 东 ，沈卫德 1 2 （苏州大学医学部基础医学与生物科学学院，江苏苏州 215123 ； 现代丝绸国家工程实验室，江苏苏州 215123 ； 3 江苏大学生命科学研究院，江苏镇江 212013 ） 摘要： 【目的】获得家蚕溶茧酶基因的全长序列，实现溶茧酶基因在大肠杆菌中的融合表达。【方法】利用 cDNA末端扩增技术（RLM-RACE）克隆了家蚕溶茧酶基因cDNA序列（GenBank 登录号：EF428980）。【结果】家蚕 溶茧酶基因cDNA序列全长1 047 bp，其中780 bp的蛋白质编码区可编码260个氨基酸，预测蛋白质分子量为27.6 kD，等电点（pI）为8.89。家蚕溶茧酶基因包含4个内含子。用Signal P 3.0 Server 程序分析家蚕溶茧酶基因， 预测其从第 1～22 位为信号肽序列。SMART 分析结果预测其第 34～254 位氨基酸序列具有类胰蛋白的丝氨酸蛋白 酶活性。重组质粒 pET-32a-Cocoonase 转化 E.coli BL21 进行原核表达，SDS分析结果表明,家蚕溶茧酶基 因以融合蛋白形式表达，相对分子量为 48 kD。【结论】本研究成功地克隆、表达了家蚕溶茧酶基因，分析和预 测了它的结构和功能，为其进一步的生物学功能研究及其应用奠定了基础。 关键词：家蚕；溶茧酶基因；cDNA片段末端扩增；序列分析；原核表达 Cloning and Expression of the Cocoonase Gene from Bombyx mori 1 3 1,2 1 1,2 WU Yu-dan , WANG Wen-bing , LI Bing , WANG Dong , SHEN Wei-de 1 2 ( School of Basic Medicine and Biological Sciences, Medical College of Soochow University, Suzhou 215123, Jiangsu; The State Engineering Laboratory of Modern Silk, Suzhou 215123, Jiangsu; 3School of Life Science, Jiangsu University, Zhenjiang 212013) Abstract: 【Objective 】 This study was carried out to obtain and analyze the sequence of the Cocoonase gene from Bombyx mori, and to produce the fusion protein of the Cocoonase gene in E. coli . 【Methods 】 The cDNA se