第5章 植物基因工程.pdfVIP

第一节 植物基因工程基本技术 第5章 植物基因工程 （一）植物基因工程的基本路线 1、目的基因分离和鉴定 2、植物表达载体的构建 我国科学工作 者，用转基因技 3、繁殖扩增重组DNA 术，可以转变矮 4、目的基因向植物细胞的 牵牛花的花色， 使矮牵牛花的花 转化 色更加丰富多彩。 5、转基因植株的筛选和鉴 定 （二）外源基因导入植物的方法 （三）植物表达载体——Ti质粒衍生的载体 转化方法 受体细胞 特点 Ti质粒 农杆菌介 植物组织、幼胚、使用最广泛，主要用于双子叶植 导法 花粉细胞 物，近年来在单子叶中也获得了 形状及大小: 环状DNA 分子, 分子量90～ 6 突破。 150×10 D, 其长度约200～250kb。 再生效率高，大多为单拷贝转移。 类型：章鱼碱型、胭脂碱型和农杆碱型。 基因枪转 愈伤组织、幼胚、适用多种植物、转化率低、转化 化法 细胞器、悬浮细 费用高、不易获得再生植株 组成： 胞 ¸ T-DNA区：决定肿瘤的形态和冠瘤碱的合成，两端25bp同向重复 电激法 原生质体 方法简便，细胞毒性低，但转化 序列（左臂和右臂）。 效率低，需要设备，不易再生。 ¸ 毒性(vir) 区：位于T-DNA 左侧, 长约35kb,分virA～ J 至少10 个操纵子，基因的产物直接参与T-DNA加工和转移过程。 ¸ 结合转移区（con）：调控Ti质粒在农杆菌之间的结合转移。 ¸ 复制起始区（ori）：调控Ti质粒的自我复制。 Ti质粒 Ti质粒衍生的双元载体 植物表达载体pBI121 强启动子：35S 抗性标记：Kan 融合表达：GUS 1