7300荧光定量PCR仪资料.pdf

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2017-09-01 发布于广东
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ABI Prism® 7300型荧光定量PCR仪用户基本操作培训美国应用生物系统中国公司客户服务部 1 内容提要 1、仪器简况 2 、定量PCR的数学原理 3 、定量PCR的化学原理 4 、等位基因鉴定原理 5 、定量PCR 实验 6、定量PCR的数据处理 7 、日常维护 8 、应用举例 2 仪器简况光学结构示意图光源灯滤光镜反射镜 CCD 相机双色镜夫累尔透镜多元镜 96孔透镜组滤镜轮 96孔板 4 7300功能一览 • 绝对定量(Absolute Quantification) – 自动计算基线、阈值、C 值、浓度、百分比 T • 相对定量(Relative Quantification) • 等位基因分型(Allelic Discrimination) • 阴阳性鉴定(Plus/Minus with IPC) 5 7300推荐使用的荧光组合报告荧光(Filter A) FAM™ 或SYBR® Green 报告荧光(Filter B) VIC™ 或JOE™ 淬灭或报告荧光(Filter C) TAMRA™ 或NED™ 参比荧光(Filter D) ROX™ 6 定量PCR的数学原理 PCR曲线有两种表达形式线性图谱半对数图谱 8 典型的PCR分4个阶段平台期线性增长期指数增长期基线期 9 起点定量与终点定量起始DNA量是样本中本来的量，更有意义；终点DNA量经过PCR “加工” ，不是研究所需要的数据起点定量误差小，终点定量误差大终点定量同一个样品重复96次