AMV和MMLV逆转录酶的特性及区别.pptVIP

AMV和MMLV逆转录酶的特性 Marketing Dept Tim Marketing Dept Tim AMV来自禽成纤维病毒逆转录酶，引物延伸反应通常用AMV，AMV性能更好，对次级结构耐受。用AMV的延伸温度可达55℃, 以消除次级结构，但在这样温度下，引物延伸反应的得率通常降低。 M-MLV来自鼠白血病逆转录酶，M-MLV的最适温度为37℃，在更高温度下，M-MLV不稳定，但M-MLV可合成更长的产物，这一特点对引物延伸反应不适用，因引物延伸反应所得的产物一般较短，为100-500个核苷酸。 什么是AMV和M-MLV？ 如果RNA非常复杂，含有二级结构等，AMV保温温度要高，反转录效果要比M-MLV好AMV和M-MLV在本身的聚合酶活性之外，都具有内源RNaseH活性。 AMV要比M-MLV RNaseH的活性要高-----RNaseH活性同反转录酶的聚合酶活性相互竞争RNA模板与DNA引物或cDNA延伸链间形成的杂合链，并降解RNA：DNA复合物中的RNA链。被RNaseH活性所降解的RNA模板不能再作为合成cDNA的有效底物，降低了cDNA合成的产量和长度，这点来说AMV不如M-MLV效果好。 AMV和M-MLV的区别（一） AMV和M-MLV的区别（二） 　 AMV M-MLV 热稳定性 好，可达55° 差，一般为37° Rnase H活性 强 弱 cDNA合成长度 短 长，可达2-3kb cDNA合成得率 低 较高 对抗二级结构能力 强 弱 对抗高GC能力 强 弱 一般而言，M-MLV更优于AMV，也是市场主流产品；而AMV由于是禽类来源，用于禽流感检测较多 二代RT酶主要是MMLV突变酶 　 野生型M-MLV 第二代M-MLV（ABM） 热稳定性 差，一般为37° 好，工作温度最高可至50度 Rnase H活性 弱 无 cDNA合成长度 长，可达2-3kb 长，可达9-15kb cDNA合成得率 较高 很高（低至0.1pgRNA量） cDNA保真性 较弱 强(错配率低) 对抗二级结构能力 弱 强 对抗高GC能力 弱 强 Thanks！