凝血酶激活的纤溶抑制物（TAFI）测定试剂盒（酶联免疫法）说 ….docVIP

尿二乙酰精胺（DAS）测定试剂盒（酶联免疫法）说明书 【产品名称】 中文名称：尿二乙酰精胺（DAS）测定试剂盒（酶联免疫法） 英文名称：Diagnostic Kit for Urinary Diacetylspermine（DAS）(ELISA) 【包装规格】96测试/盒 【预期用途】 本试剂盒用于体外定量检测人尿液中二乙酰精胺（N1, N12-Diacetylspermine, DAS）的含量。临床上用于结肠癌的辅助诊断及评价结肠癌治疗效果和预后的检测判定。本试剂盒不可作为结肠癌早期诊断或确诊的依据，不宜用于普通人群的结肠癌筛查。 【检验原理】 二乙酰精胺的结构简式为AcHN(CH2)3NH(CH2)4NH(CH2)3NHAc，分子式为C14H30N4O2，分子量286.41，在体内由鸟氨酸经鸟氨酸脱羧酶作用生成。多胺，诸如精胺、亚精胺，通常被认为参与DNA和蛋白质的合成，从而控制细胞扩增。研究发现，多胺的二乙酰基衍生物含量与癌症等级的相关性更好，癌症患者尿液中二乙酰精胺浓度相对于健康人显著升高。 本试剂盒采用竞争性酶联免疫反应原理。样品与过氧化物酶标记的抗二乙酰精胺单克隆抗体进行预反应，二乙酰精胺与酶标抗体形成抗原-抗体复合物再将预反应液加入到包被乙酰精胺抗原的酶标板中进行反应，包被抗原与样品中的二乙酰精胺竞争性结合酶标抗体，样品中的二乙酰精胺越多，固相抗原结合的酶标抗体越少，显色颜色越浅经过洗涤步骤后，将游离的抗原抗体复合物去除，在490nm波长下读取吸光值。根据标准曲线（四参数回归）计算出样品中的二乙酰精胺含量。 反应原理示意图 【试剂盒组成】 序号 组件名称 规格 数量 备注 01 包被酶标板 96孔 1板 冻干、铝箔袋密封 02 二乙酰精胺标准品 180μL 2支 300nM 03 样品稀释液 45mL 1瓶 04 抗体稀释液 10mL 1瓶 05 酶标抗体浓缩液 70μL 1支 100倍浓度，避光保存 06 反应底物 13mg 2片 邻苯二胺 07 显色缓冲液 30mL 1瓶 08 反应终止液 15mL 1瓶 0.9mol/L硫酸 09 浓缩洗液 30mL 1瓶 20倍浓度 10 稀释板 96孔 1板 注意：1）不同批号试剂盒中各组份不可以互换。 2）本试剂盒不包含测定肌酸酐需要的试剂，建议肌酸酐含量测定使用生化分析仪。 【存储条件及有效期】 -20℃~-30℃避光存储，有效期12个月。 本试剂盒仅提供最多2次的使用量，第1次使用结束后，剩余试剂应-20℃~-30℃避光存储直至有效期。其中，开封后未使用的酶标板条应放入含有干燥剂的铝箔袋内，密封保存，以防止吸潮。 【适用仪器】 酶标仪。波长范围：340nm~900nm；吸光值范围：0.000~4.000Abs；吸光度测量精度在±1％±0.01Abs；滤光片：490nm或492nm。 洗板机。适用96孔酶标板。 移液器。量程为1-10μL，10-100μL或20-200μL，100-1000μL的单道移液器；量程为50-300μL的多道移液器。 【样本要求】 样本：尿液。 采集：样品管收集。 处理：3500rpm 离心10分钟，保留上清液。如果上述离心条件得到的上清仍有混浊物，应提高离心转数或时间。 储存：尿上清如当天使用，建议2-8℃保存；如长期保存，建议-20℃以下冷冻保存；保存容器建议采用聚丙烯（PP）材质试管。应避免反复冻融，若冷冻融化后使用，建议同条件离心取上清。 【检验方法】 1. 工作液配制 （1）洗液工作液：取浓缩洗液（20×）30mL，加入到570mL超纯水或蒸馏水中，充分混匀，即洗液工作液。 注意：可适当水浴加热（不超过60℃）使浓缩洗液快速融化，并确保稀释前无结晶。稀释好的工作液可在2-8℃ 保存7天。 （2）酶标抗体工作液：取酶标抗体浓缩液（100×）50μL，加入到5mL抗体稀释液中，充分混匀，即酶标抗体工作液。注意：酶标抗体工作液现用现配，不可储存；可按照比例根据实际需要配制所需要的量。 （3）显色液：临用前，向13mL显色缓冲液加入一片OPD，使其充分溶解，即显色液。注意：显色液现用现配，不可储存。 2. 待测样本制备 取5μL尿上清液加入到495μL样品稀释液中，充分混匀，制成100倍稀释的尿样，作为待测样本。可根据实际条件调整尿上清的取样量，建议取样量不小于2μL。 3. 校准程序 （1）标准品的稀释：以二乙酰精胺标准品（300nM）为母液，3倍梯度稀释，制作7个浓度的标准品（稀释板中完成），如下表所示： 标准液浓度（nM） 300 100 33.33 11.11 3.70 1.235 0.412 300nM标准品（μL） 150 50 50 50 50 50 50 样品稀释液（μL） 0