动力学荧光分析法测定己烯雌酚.docVIP

丁基罗丹明B指示荧光分析法测定己烯雌酚 杜凌云1，朱琳2，王术皓1* （1聊城大学化学化工学院， 聊城 252059，2青岛第十五中学， 青岛 266023） 摘 要：基于在酸性介质中，Fe2 +-H2O2体系产生的羟自由基可以迅速氧化丁基罗丹明B使其荧光猝灭，而己烯雌酚可以部分清除溶液中的羟自由基，从而使荧光猝灭程度减弱，据此建立了测定己烯雌酚的荧光分析新方法。该方法的检出限为0.045ng/mL，线性范围为0.1-50 ng/mL，而且方法操作简便、测定快速，将其用于水样中己烯雌酚的测定，结果满意。 关键词：荧光法；己烯雌酚；丁基罗丹明B；羟自由基 己烯雌酚(DES)是一种人工合成的雌激素，化学名为1,2- 双（4- 羟苯基）- 1,2-二乙基乙烯，俗名乙底酚，为无色结晶或白色结晶性粉末。在医学临床上普遍用于妇科病的治疗，由于DES具有促进动物增重，增加蛋白质沉积，提高饲料转化率的作用，曾被广泛用于饲料添加剂。20世纪70年代以来，人们发现DES具有致畸和致癌的毒性，是一种内分泌干扰物质。美国从1979年开始禁止使用DES作为食品动物的促生长剂[1]，欧盟也已禁止DES用于食品动物并限制进口其他国家使用过该药的动物生产的食品[2]，2002年我国农业部第176号公告和第193号公告中也规定禁止使用DES。DES是脂溶性物质，很难降解，易在动物体内残留，即使其排除体外也会在水源和土壤中富集，造成环境污染恶性循环。因此，研究高灵敏度检测水体中己烯雌酚的方法具有重要意义。 目前国内外文献报道用于DES残留检测的方法很多，主要有免疫分析法[3,[4]、化学发光法[5]、流动注射化学发光法[6]、高效液相色谱法[7]、气相色谱法[8]和固相萃取法[9]等。 收稿日期：2012-4-21，修订日期：2031-3-18 基金项目：国家自然科学基金（编号为，山东省自然科学基金（编号为：2005ZX12）和山东省“泰山学者”建设工程专项经费的资助。 作者简介：杜凌云（1965-），女，山东聊城人，副教授，主要从事光分析化学研究。 *联系人。E-mail: shuhaowang@ 本工作基于己烯雌酚对羟自由基与丁基罗丹明B氧化还原反应的阻抑作用，建立了测定己烯雌酚的荧光分析新方法。该方法具有灵敏度高、仪器操作简便、试剂便宜等优点。 1 试验部分 1.1仪器与试剂 LS-55型荧光分光光度计。 丁基罗丹明B：0.02g/L；Britton-Robinson缓冲溶液：0.04mol/L；硫酸亚铁溶液：1.0mmol/L，用硫酸（5+95）溶液配制；过氧化氢溶液：0.01%（体积分数）；DES溶液：1.0mg/L。 所用试剂为分析纯，试验水为二次蒸馏水。 1.2试验方法 于一系列10 mL具塞刻度试管中，按顺序加入0.02g/L丁基罗丹明B 1.0mL；0.04mol/L缓冲溶液0.1mL；1.0mmol/L硫酸亚铁0.5mL；0.01%H2O2 0.3mL，一定量的DES溶液，用水稀释至刻度后摇匀，静置6min后，以560nm为激发波长，在582 nm波长处，测定各溶液的荧光强度（F），以相应的不含DES的溶液为空白试样，其荧光强度为（F0），计算ΔF=F-F0。 2 结果与讨论 2.1荧光光谱 对各反应体系以560 nm为激发波长，在520～650 nm范围内扫描发射光谱，见图1。丁基罗丹明B具有醌型的刚性平面结构[10]，有较强的荧光，最大激发波长为560 nm，最大发射波长为582 nm。从图1中可以看出：缓冲溶液对丁基罗丹明B荧光强度无影响（曲线1、2）；加入过氧化氢和Fe2 +后，荧光强度显著下降（曲线2，5），说明过氧化氢和Fe2 +产生的羟自由基能迅速氧化丁基罗丹明B，使其分子结构破坏，导致荧光猝灭[13]；加入己烯雌酚后，己烯雌酚可以与羟自由基反应[14]，从而阻抑羟自由基氧化丁基罗丹明B的荧光猝灭反应，使其荧光强度下降程度减弱，而且随己烯雌酚浓度的增大减弱程度减小（曲线3、4）。试验选择λex /λem = 560/ 582 nm，激发与发射狭缝宽度分别为10 nm 和3.5 nm。 图1 荧光光谱 Fig.1 Fluorescence spectra 1——丁基罗丹明B 2——丁基罗丹明B+缓冲溶液 3——丁基罗丹明B+缓冲溶液+Fe2++H2O2+50 ng/mL DES 4——丁基罗丹明B+缓冲溶液+Fe2++H2O2+10 ng/mL DES 5——丁基罗丹明B+缓冲溶液+Fe2++ H2O2 丁基罗丹明B：2.0mg/L；B-R缓冲溶液：0.4mmol/L；硫酸亚铁溶液：0.05mmol/L；过氧化氢溶液：0.0003% 结合试验结果，己烯雌酚抑制羟自由基氧化丁基罗丹明B（b-RhB）反应的机理推测