第三节提取与分离一、提取1、黄酮苷类与极性较大的苷元.ppt

* 第三节 提取与分离 一、提取 1、黄酮苷类与极性较大的苷元(羟基黄酮,双黄酮,橙酮,查耳酮等)——丙酮,乙酸乙酯,乙醇,甲醇,甲醇-水(1:1)等提取 2、多糖苷类: 沸水提取 3、花色苷类: 0.1% 盐酸提取 4、黄酮苷元: 氯仿,乙醚,乙酸乙酯等提取 （一）溶剂萃取法 1、原理：黄酮类化合物与混入杂质极性不同 2、举例： 石油醚 —除叶绿素、胡萝卜素等脂溶性色素； 乙醇 —— 除蛋白质、多糖类等水溶性杂质。 （二）碱提取酸沉淀法 1、原理：黄酮类化合物易溶于碱性水。 2、常用碱液：碳酸钠, 氢氧化钠, 氢氧化钙等 例如：从槐花米提取芦丁过程 槐花米→加6倍量水→煮沸→以石灰乳调 pH=8-9→微沸30min→趁热过滤→残渣再 水煮一次→合并两次滤液→ 60-70℃时以 浓盐酸调节pH=4-5→静置24小时→抽滤 →水洗至中性→ 60℃干燥得粗品芦丁→ 沸水重结晶 →70-80℃干燥得纯品芦丁。 （三）碳粉吸附法 1、适用范围：主要用于苷类的精制。 2、使用过程： ① 植物甲醇粗提物，加入活性炭，检查上清； ② 沸水、沸甲醇、7%酚/水、15%酚/醇洗脱； ③ 减压浓缩7%酚/水洗脱液至小体积； ④ 乙醚除去残留的酚 ⑤ 水层中含有较纯的黄酮苷类。 （四）聚酰胺吸附法 1、 聚酰胺对于黄酮类化合物是比较理想的 吸附剂 2、洗脱剂：不同浓度的乙醇、丙酮以及碱水 3、分离效果：粗分 例如：银杏叶黄酮的提取 （五）超临界流体萃取法 1、以CO2为单一流体萃取极性较低的游离黄酮或黄酮的碳苷类； 2、在CO2中加入水、乙醇等作为夹带剂，萃取极性较高的黄酮或黄酮苷类。 例如：从甘草中提取黄酮类化合物，以CO2为单一流体可萃取极性较低的干草查耳酮A、B； 在CO2-水-乙醇溶剂体系中则可提取极性较高的甘草素与异甘草素。 二、分离 （一）柱色谱法 1. 硅胶柱色谱： ① 主要适于分离异黄酮、二氢黄酮、二氢黄酮醇及高度甲基化（或乙酰化）的黄酮及黄酮醇类。 ② 在加水去活化后可用于分离极性较大的化合物，如多羟基黄酮醇及其苷类等。 ③ 硅胶中混存少量金属离子，应预先用浓盐酸处理除去，以免干扰分离效果。 ④ 分离黄酮苷元时，用氯仿-甲醇混合溶剂做移动相； ⑤ 分离黄酮苷时，用氯仿-甲醇-水或乙酸乙酯-丙酮-水做移动相。 2. 聚酰胺柱色谱 ① 可用于分离各种类型的黄酮类化合物， 包括苷与苷元、查耳酮与二氢黄酮等。 ② 分离的机理: 主要为氢键吸附 ，其吸附 强度主要取决于羟基的数目、位置以及溶剂 的影响。 ③ 吸附规律如下: a. 酚羟基数目越多，吸附力越强； b. 如酚羟基所处位置易形成分子内氢键， 则吸附力减小。 c. 分子内芳香程度越高、共轭双键越多， 则吸附力增强。 总之，一般吸附力由大到小的顺序为： 黄酮醇 黄酮 二氢黄酮醇 异黄酮 ④ 洗脱规律如下: 不同类型黄酮化合物，先后流出顺序为： 异黄酮 二氢黄酮醇 黄酮 黄酮醇 b. 相同苷元，洗脱先后顺序为： 叁糖苷 双糖苷 单糖苷 苷元 c. 母核上增加羟基，洗脱速度即相应下降； d. 羟基数目相同时，其位置影响洗脱顺序： 邻位羟基黄酮 对位（或间位）羟基黄酮 e. 查耳酮比相应二氢黄酮难于洗脱。 f. 洗脱能力与介质有关 水 甲醇或乙醇 丙酮 稀NaOH水 溶液或氨水 甲酰胺 二甲基甲酰胺 尿素水溶液 ⑤ 若用含水移动相(甲醇/水)，则聚酰胺对 苷元的吸附力较强； 以有机溶剂(氯仿/甲醇)做移动相，则相反。 3. 葡聚糖凝胶柱色谱 ① Sephadex G（适用于水溶性成分分离）和 Sephadex LH-20（可用于亲脂性成分分离） ② 分离机理: ※ 分离黄酮苷元时，吸附作用为主导 取决于游离酚羟基的数目。 ※ 分离黄酮苷时，分子筛作用为主导, 取决于分子量的大小。 例如：黄酮苷元的洗脱顺序由易到难为 5，7，4′-三羟基黄酮 3，5，7，3’，4′-五羟基黄酮 3，5，7，3’，4′，5’-六羟基黄酮 ④ 常用洗脱剂： 碱性水溶液、含盐水溶液、 醇及含水醇等。 ? 其它洗脱溶剂：含水丙酮、甲醇－氯仿等 （二）梯度pH萃取法 1、适用范围：酸性强弱不同黄酮苷元的分离。 2、原理：根据黄酮类苷元酚羟基数目及位置 不同其酸性强弱也不同的性质，可以将总黄 酮溶于有机溶剂后，依次用5%NaHCO3、 5%Na2CO3、0.2%NaOH及4%NaOH水溶液萃取，将黄酮按较强酸性至较弱酸性的顺序进行分离。 3、分离规律如下： 酸性