利用微卫星多重PCR和带型分析鉴别歧视酿酒酵母菌株.docVIP

利用微卫星多重PCR和带型分析鉴别歧视酿酒酵母菌株 Enrico Vaudano_, Emilia Garcia-Moruno 摘要 我们提出了一个多重PCR分析苯酚的DNA提取快速PCR的优化程序扩增SC8132XYOR267C位点和SCPTSY7分析产生的碎片聚丙烯酰胺凝胶电泳区分30个小组测试的商业酒株。该方法成功地生态研究中两个菌株之间的优势温度是在两个这个方法日常行业和低预算的歧视酵母菌株生产是有用的。关键词：微卫星;聚合酶链式反应;酵母菌株;葡萄酒，发酵(Fleet and Heard,1993). 生态研究表明酵母株不同的认知和行为学(Epifanio et al., 1999; Torijaet al., 2003).(recently reviewed by Beh et al., 2006) (Carle and Olson,1985; Blondin and Vezinhet, 1988)和限制性片段长度多态性（RFLP）分析mDNA（Querolet，1992），以及基于PCR的方法，包括内部转录序列（ITS）的核糖体DNA测序（Montrocher，1998），插入位点多态性三角洲元素(Cameron et al., 1979;Ness et al., 1993)，扩增片段长度多态性（AFLP）(De Barros Lopes et al., 1999),，随机扩增多态性DNA（RAPD）(Baleiras-Couto et al., 1996),，内含子剪接序列扩增(De Barros Lopeset al., 1996)和PCR线粒体基因的内含子(Lo′ pez et al., 2003). 这些方法代表就解决和处理在经典生理测试时间上的增强，但其中有些限制，因为他们很难对常规分析，或者当他们很容易实现时他们在应变水平不够歧视适用。此外，如RAPD三角洲的一些方法，再现性取决于DNA模板的纯度和浓度 (Ferna′ ndez-Espinar et al., 2001; Beh et al., 2006). 这些缺点意味着昂贵和费时的DNA清理步骤，在某些情况下还需要对一些反应来评估非重复性的发生. 基于重复序列位点的长度多态性简单分散在整个基因组，微卫星分析已成功用于酿酒酵母株歧视(Field and Wills, 1998;Gonzalez Techera et al., 2001; Pe′rez et al., 2001;Hennequin et al., 2001; Malgoire et al., 2005). 最近，与多重的微卫星多态性程度高PCR技术已经允许商业酵母菌株的大量分离(Schuller et al., 2004;Bradbury et al., 2005; Legras et al., 2005). 这种歧视性的权力，DNA的结合其鲁棒性和适用性原始模板(Howell et al., 2004)，使得PCR微卫星位点在应变歧视方面变成了一种最流行的方法。 该方法的日常应用的瓶颈发生在扩增分析步：使用聚丙烯酰胺凝胶和序列测序仪器，以确定扩增产物的大小是费时又费钱。要绕过这个限制，提出了简单的具有高强度琼脂糖电泳. (Routman and Cheverud, 1994;Ferraro et al., 1998). 最近，豪威尔等（2004）建议在酵母菌株基因分型的基础上PCR扩增SC8132X，扩增染色上浆和聚丙烯酰胺凝胶电泳和溴化乙锭. 要构造一个即使在预算低，实验室高投入中迅速和充分适用歧视性的常规方法，我们已经实施了微卫星位点复合扩增三个高度多态性(Gonzalez Techera et al., 2001)，其次波段分析产生琼脂糖凝胶电泳图案。 作为第一步，我们检查了29个市场提供选择的参考株面板加上酿酒酵母型菌株的歧视性的力量。对该方法的适宜性进行了检查，然后测试发酵温度对生长率和两个选定的合作竞争能力的影响的菌株接种试验。