兰花的组织培养74717.docVIP

兰花的组织培养 摘要: 对兰花的组织培养进行了综述。着重阐述了兰花组织培养中组织培养程序、外植体的选择、培养基与激素的选择、培养方式和培养条件的研究进展情况。 关键词: 兰花; 组织培养; 外植体; 培养基 兰科(Orchidaceae) 是有花植物中最大的一个科, 约有800 属, 25 000～30 000 种, 广泛分布于全球各地。兰花是整个兰科植物的总称, 常见的有春兰、蕙兰、建兰、蝴蝶兰、石斛、卡特兰, 文心等, 其花具有极高的欣赏价值和经济价值。有些种类如天麻等则具有极高的药用价值。兰花的组织培养始于20世纪60 年代。Morel[1]采用大花蕙兰的茎尖, 在含有细胞分裂素的KC 培养基上进行培养, 茎尖分生组织膨大形成原球茎, 并分化出根和叶, 首次获得兰花无病毒小植株。目前大约已有60 余属数百种兰花可以用组织培养的方法进行繁殖。1 组织培养程序与外植体选择 种子、胚形态建成途径 用于兰花离体繁殖的外植体材料很多, 通常选择有新芽、幼叶、茎尖等。茎尖是最早用于兰花快速繁殖的外植体。大花蕙兰(Cymbidium) 、嘉德丽亚兰(Cattleya) 、石斛兰(Dendrobim) 蝴蝶兰( Phalaeanopsis) 、文心兰(Oncidium) 等首先在茎尖培养中取得成功[2]。侧芽的应用也很广泛, 一般认为带1～2 个叶原基的茎原椎成活率高, 中间部位侧芽成活率及生长率较高。但因为有的兰花只生一茎,摘取茎尖就有可能丧失母株, 因此, 人们在更大范围内寻找外植体。用叶片作外植体可以减轻或避免对母株的伤害。大多数以叶片为外植体的成功报道是取试管苗的幼叶为培养材料, 从成熟植株上取幼叶为外植体培养成功的报道不多。有研究指出: 蝴蝶兰试管苗幼叶原球茎发生率可达90%, 而成熟叶对诱导反应极弱[。这可能是由于成熟植物组织向培养基中释放高浓度的抑制生长物质, 严重影响兰花组织的存活。现已报道的蝴蝶兰外植体材料各异, 不同的外植体其诱导的效率也不同 表1 不同外植体原球茎的诱导效率 外植体 最高诱导率/% 特点( 见参考文献) 子 100 产生性状分离, 可用于育种 胚 80 产生性状分离, 可用于育种 花梗节间 88 保持母株性状, 取材受时间限制 花梗腋芽 94 保持母株性状, 取材受时间限制[ 叶片( 未切割) 90 保持母株性状, 对母株伤害不大 叶片( 切割) 61 保持母株性状, 对母株伤害不大[ 根尖 75 保持母株性状, 对母株无影响 茎尖 100 保持母株性状, 损伤母株 原球茎( Protocorm-likebody) 是兰科植物组织培养产生的特有现象, 是兰花组织培养的重要形式之一。自1960 年Morel 由惠兰属的象牙色惠兰、罗式惠兰、显花惠兰、达式惠兰等的茎尖培养获得无病毒兰花植株以来 , 多年来经过大量的试验与研究,得出影响原球茎诱导的原因有: ( 1) 不同外植体间的诱导差异。如以叶尖、根尖、花梗芽等不同外植体来诱导原球茎, 其诱导率有所不同; 即使是同一叶片,采自不同部位的诱导率也不同。( 2) 不同培养基和不同激素种类及配比的影响, 从MS 和KC 培养基上均能诱导出原球茎。由MS 培养基诱导出的原球茎生长迅速, 有利于增殖, 而KC 培养基则有利于芽的分化。供试外植体在无激素空白培养基上均未诱导出原球茎, 在其他培养基上亦存在着诱导差异。最适于叶片培养的搭配是MS+ 6-BA3. 0mg/ L, 适于根尖和茎尖的激素浓度是6-BA0. 5mg/ L。NAA 对蝴蝶兰原球茎的产生无促进作用。( 3) 不同浓度的6-BA和NAA 组合对蝴蝶兰原球茎诱导率的影响。原球茎的诱导不仅取决于6-BA 和NAA 的绝对数量, 而且取决于二者的相对比例。在6-BA/ NAA 比值最大的条件下, 诱导率处于最低状态; 在