普萘洛尔、平阳霉素对脐静脉血管内皮细胞的凋亡及VEGF表达影响的体外实验研究.pdf

目 录 普萘洛尔、平阳霉素对血管内皮细胞的凋亡及 VEGF 表达量影响的体 外实验研究 摘 要 英文摘要 前 言 1、普萘洛尔、平阳霉素对脐静脉血管内皮细胞存活的影响 1.1 材料和方法 1.2 结 果 1.3 讨论 2、普萘洛尔、平阳霉素对脐静脉血管内皮细胞的凋亡蛋白 Caspase-3 表达变化的影响 2.1 材料和方法 2.2 结 果 2.3 讨论 3、普萘洛尔、平阳霉素对脐静脉血管内皮细胞的VEGF 表达的变化的 影响 3.1 材料与方法 3.2 结 果 3.3 讨 论 2 全文小结 全文讨论 本研究不足之处 英文缩略词对照表 参考文献 综 述 3 普萘洛尔、平阳霉素对脐静脉血管内皮细胞的凋亡及 VEGF 表达影响的体外 实验研究 摘 要 目的：血管瘤是一种常见的新生儿先天性的良性肿瘤，主要来源于胚胎发育 过程中残余的胚胎或血管内皮细胞，分为真性血管瘤与脉管畸形。真性血管 瘤具有血管内皮细胞异常增殖的特点，口腔颌面部好发，80%可以随年龄增 长，到 2 岁以后可以自行消退，但仍有近 20%的血管瘤不能消退。目前对血 管瘤的治疗没有统一有效简单的方案。2008 年，法国医生 Leaute-Labreze 等偶然发现口服普萘洛尔能促进血管瘤消退，但是到目前为止，普萘洛尔治 疗血管瘤的机制尚不清楚。 本实验以离体培养的人脐静脉内皮细胞为模型，通过体外试验检验普萘 洛尔对血管内皮细胞生长、凋亡、生长因子表达的影响作用。Caspase-3 是 细胞凋亡的核心控制凋亡蛋白；血管内皮细胞生长因子参与促进内皮细胞的 增殖和迁移、增加血管通透性，它可以刺激血管内皮细胞的增殖、迁移和管 型的形成；故本实验研究脐静脉内皮细胞在普萘洛尔、平阳霉素作用下的存 活率、Caspase-3 及血管内皮生长因子表达变化的影响，并用经典的抗肿瘤 药物平阳霉素作为阳性对照，为普萘洛尔治疗血管瘤的机理以及治疗前景提 供理论依据。方法：以 HUVEC 为模型，分别在培养的脐静脉内皮细胞中加入 不同浓度的普萘洛尔、平阳霉素、空白对照，药物浓度梯度为 128ug/ml， 64ug/ml，32ug/ml，16ug/ml，8ug/ml，4ug/ml，比较两种药物作用下细胞 的生存与增殖能力；采用 MTT 法检测药物作用下细胞的存活率，蛋白质印迹 4 法 (Western Blot)法检测比较药物作用下凋亡蛋白 Casepase-3 的表达情况； 酶联免疫吸附测定法 (ELISA)法测定比较比较生长因子 VEGF 蛋白的表达变 化。以上实验结果数据使用 SPSS16.0 软件统计分析；结果：1、对照组、平 阳霉素组、普萘洛尔组在 48h 时无明显差异性（P0.05）；在24h 时出现了 药物组同对照组比较细胞的增殖差异明显 （P0.05），其中平阳霉素组抑制 率明显高于普萘洛尔；在浓度低于 128ug/ml 时，平阳霉素抑制血管内皮细 胞增殖率不随浓度增加而增强，普萘洛尔组抑制细胞增殖率随药物浓度的增 加，抑制率明显增强。2、对照组、平阳霉素组、普萘洛尔组血管内皮细胞 的凋亡蛋白Caspase-3 均有表达，平阳霉素组表达量最高，普萘洛尔次之， 对照组较少。3、对照组、平阳霉素组、普萘洛尔组在 24h 的时相点 VEGF 表 达量有明显差异（P0.05），普萘洛尔、平阳霉素均能明显抑制生长因子 VEGF 蛋白表达，普萘洛尔抑制作用与平阳霉素无差异。结论：HUVEC 在普萘洛尔 的作用下表现出了细胞增殖能力的减低，VEGF 蛋白表达明显降低，凋亡蛋白 Caspase-3 表达明显增加；其结果表明普萘洛尔能抑制血管内皮细胞的生长， 继而对新生儿血管瘤有一定的治疗效果，抑制血管内皮细胞生长因子 VEGF 蛋白的表达及促进凋亡蛋白 Caspase-3 的表达属于其部分作用机制。 关键词： 脐静