第7章细菌感染的检查方法与防治原则.docVIP

第7章 细菌感染的检查方法与防治原则 致病菌能引起多种感染和传染病，其诊断除可根据临床症状、体征和一般检验外，采取合适的临床标本进行细菌学和血清学检验，在确诊病因上极为重要。 获得性免疫的产生，可通过患病、隐性感染、预防接种、注射抗毒素等方式（表7-1）。 表7-1获得性免疫的产生方式 自然主动免疫：患病、隐性感染 人工主动免疫：接种疫苗、类毒素等 自然被动免疫：通过胎盘、初乳 人工被动免疫：注射抗毒素、丙种球蛋白、转移因子等 人工免疫是采用人工方法，将疫苗、类毒素等或含有某种特异性抗体、细胞免疫制剂等接种于人体，以增强宿主体的抗病能力。用于人工免疫的免疫原（疫苗、类毒素等）、免疫血清、细胞制剂，以及诊断制剂（结核菌素、诊断血清、诊断菌液等）的生物性制剂统称为生物制品（bioproduct）。 第一节 细菌学诊断 标本采集与送检过程是否符合下列几个原则，将直接影响到致病菌检出的成败。 1．采取标本时应注意无菌操作，尽量避免杂菌污染。 2．根据致病菌在患者不同病期的体内分布和排出部位，采取不同标本。例如流行性脑膜炎病人取脑脊液、血液或出血瘀斑；伤寒病人在病程1～22～3polymerase chain reaction,PCR）等技术。 直接涂片检查 凡在形态和染色性上具有特征的致病菌，直接涂片染色后镜检有助于初步诊断。例如痰中查见抗酸性细长杆菌，脓液中发现革兰阳性葡萄串状球菌，或咽喉假膜中有异染颗粒的棒状杆菌时，可分别初步诊断为结核分枝杆菌、葡萄球菌或白喉棒状杆菌。在某些情况下，也可在直接涂片后，以特异性荧光抗体染色在荧光显微镜下观察，若出现有发荧光的菌体就是欲检验的细菌。例如粪便中的志贺菌、霍乱弧菌等可用此技术快速检出。 分离培养 原则上所有标本均应作分离培养，以获得纯培养后进一步鉴定。原为无菌部位采取的血液、脑脊液等标本，可直接接种至营养丰富的液体或固体培养基。从正常菌群存在部位采取的标本，应接种至选择或鉴别培养基。接种后放37℃孵育，一般经16～20h大多可生长茂盛或形成菌落。少数如布鲁菌、结核分枝杆菌生长缓慢，分别需经3～4周和4～8周才长成可见菌落。分离培养的阳性率要比直接涂片镜检高，但需时较久。因此，遇白喉等急性传染病时，可根据病人临床表现和直接涂片镜检结果作出初步诊断并及时治疗；不必等待培养报告，以免贻误治疗时间。 生化试验 细菌的代谢活动依靠系列酶的催化作用，不同致病菌具有不同的酶系，故其代谢产物不尽相同，籍此可对一些致病菌进行鉴别。例如肠道杆菌种类很多，形态、染色性基本相同，菌落亦类似。但它们的糖类和蛋白质的分解产物不完全一样，因而可利用不同基质进行生化试验予以区别之。现已有多种微量、快速、半自动或自动的细菌生化反应试剂条（板）和检测仪器研制成功，并有商品供应。 血清学试验 采用含有已知特异抗体的免疫血清与分离培养出的未知纯种细菌进行血清学试验，可以确定致病菌的种或型。常用方法是玻片凝集试验，在数分钟内就能得出结果。免疫荧光、协同凝集、对流免疫电泳、酶免疫、间接血凝、乳胶凝集等试验可快速、灵敏地检测标本中的微量致病菌特异抗原。这些方法的另一优点是即使患者已用抗生素等药物治疗，标本中的病菌被抑制或杀死培养不成功时，其特异抗原仍可检出，有助于确定病因。 动物试验 主要用于分离、鉴定致病菌，测定菌株产毒性等。常用实验动物有小鼠、豚鼠和家兔等。应按实验要求，选用一定的体重和年龄，具有高度易感性的健康动物。接种途径有皮内、皮下、腹腔、肌肉、静脉、脑内和灌胃等。接种后应仔细观察动物的食量、精神状态和局部变化，有时尚要测定体重、体温和血液等指标。若死亡应立即解剖，检查病变，或进一步作分离培养，证实由何病菌所致。含杂菌多的标本，也可通过接种易感动物获得纯培养，达到分离致病菌的目的，例如将疑患肺炎链球菌性肺炎病人痰接种至小鼠腹腔。测试细菌的产毒性，可用家兔或豚鼠皮肤检测白喉棒状杆菌是否产生白喉毒素；家兔结扎肠段测定大肠埃希菌不耐热肠毒素等。目前，多数细菌的外毒素可用ELISA法测定；志贺毒素等可用Vero细胞等测定其毒性。又细菌热原质过去用家兔来检测，现已为鲎（limulus）试验替代。 药物敏感试验 药敏试验对指导临床选择用药，及时控制感染有重要意义。方法有纸碟法、小杯法、凹孔法和试管法等，以单片纸碟法和试管稀释法常用。纸碟法是根据抑菌圈有无、大小来判定试验菌对该抗菌药物耐药或敏感。试管法是以抗菌药物的最高稀释度仍能抑制细菌生长管为终点，该管含药浓度即为试