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DNA 甲基化检测的序曲—— 亚硫酸氢盐转化 检测 DNA 甲基化的方法有很多种，生物通会在后面详细介绍。在众多方法中，研究人员常常会使 用到一项技术，那就是亚硫酸氢盐转化。DNA 的亚硫酸氢盐处理将未甲基化的胞嘧啶转化成尿嘧啶， 而甲基化的胞嘧啶保持不变。随后用测序、定量PCR 和芯片等分析来比较处理和未处理DNA 的序列， 就能确定哪些碱基是甲基化的。 尽管在理论上很简单，但亚硫酸氢盐处理真正 这款极速重亚硫酸盐处理试剂盒能为你带来 要做起来却不那么容易。如果你问一问那些做过的 飞一般的感觉，让你体验极为快速的重亚硫酸盐转 人，他们八成会告诉你不好做。首先是回收率不高， 化。使用这一款极速重亚硫酸盐处理试剂盒，从 会损失大量 DNA，有时甚至达到 50% 。其次是转 DNA 样品处理到转化后的高纯 DNA 只需90 分钟。 化效率，有时是未能彻底转化，有时则是转化过了 它的秘密就在于一款受专利保护的处理试剂，能在 头。此外，还要面临 DNA 的降解。因为亚硫酸氢 很短时间内将未甲基化的胞嘧啶彻底转化。同时这 盐处理的剧烈条件，DNA 会片段化，从而降低了 种试剂对 DNA 的伤害又极小，不像通常的高盐、 PCR 及后续分析技术的灵敏度。 高温以及低 pH 等极端条件会导致 DNA 高度片段 化。至于这种处理试剂的成分，我们当然无从得知， 目前市场上有多个厂家提供亚硫酸氢盐转化 只知道它是由两种试剂混合而成。有了它，转化即 试 剂 盒 ， 包 括 QIAGEN 、 默 克 密 理 博 、 可在 40 分钟内完成，耗时仅为其他方法的 1/10。 Sigma-Aldrich、Zymo、Life Technologies 等。 也许你又有点担心转化的效果，快是快了，但 在选购时，我们应注意关键的几点。首先，确 会不会转化不完全呢？其实，这款试剂盒的修饰转 保所有的未甲基化 CpG 位点都能完全转化，才能 化效率高达 99.9% 。无论是 1 ng DNA，还是 1 μg 获得可靠的结果。另外，我们还要关心 DNA 是否 DNA 样品，极速重亚硫酸盐处理试剂盒都一视同 能够高效回收。方法不同，实验所需的时间也有差 仁，产生灵敏且可靠的重亚硫酸盐转化结果。 异。传统的亚硫酸氢盐转化需要过夜孵育，而必威体育精装版 推出的试剂盒往往只需要 1-3 小时。 有时，过度转化也是一个大问题。不过，极速 重亚硫酸盐处理试剂盒可有一双雪亮的眼睛，只会 对于新手来说，最好还是买完整的试剂盒。试 彻底转化非甲基化的胞嘧啶，而丝毫不会转化甲基 剂盒中的试剂和操作步骤经过优化，容易得到更加 化的胞嘧啶！研究人员做过实验，用极速重亚硫酸 一致的结果。有些试剂盒中还带有对照。有些人可 盐处理试剂盒处理甲基化DNA和非甲基化DNA， 能觉得对照可有可无，然而一旦出了问题，它的重 然后用CpG Wiz® MGMT引物对进行测序。结果显 要性就凸