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生物技术通报
-研究报告· BloTEcHNoLoGYBULLETlN 2009年第8期
土壤中脂肪酶产生菌的筛选、鉴定及脂肪酶基因的克隆
玄国营 陈芳 李予霞 高剑峰
(石河子大学生命科学学院，石河子832003)
摘 要： 以橄榄油为惟一碳源进行富集培养、以罗丹明B为指示剂的平板进行初筛，摇瓶复筛得到产脂肪酶菌株；利用
滴定法、平板扩散法以及转酯反应试验，最终筛选出具有较高转酯活性脂肪酶的菌株B2。通过对B2进行形态学观察，生理生
化测定以及16SrDNA特征片段比较分析，初步确定B2为克雷伯氏茵属(Klebsiella
sp．)。通过特定引物PCR扩增得到B2茵
醇反应，经过薄层层析和高效液相检测产物为生物柴油。
关键词： 生物柴油 克雷伯氏茵 脂肪酶脂肪酶基因
The and Gene
Screening，IdentificationLipase
ofSoil Strain
Cloning LipaseProducing
Xuan Chen LiYuxiaGao
GuoyingFang Jianfeng
ScienceShihezi
(CollegeofLife of University，Shihezi832003)
oliveoilassolecarbonsourceinenrichment RhodamineBasindicatorto
Abstract： culture，and screening，onelipase—
Using
strain werescreened．B2strainwasidentifiedasKlebsiella to ob·
B2with sp．accordingmorphological
producing higherlipaseactivity
of andbiochemical．The16SrDNAwas PCRand
servation，determinationphysiological part amplifiedby sequenced．Bydesigning
K1andK2inB2strainwas PCRand can cottonoiland
specificprimers，twolipasegenes amplifiedby sequenced．Thelipasecatalyze
into alcoholassolventandacetone sedimentationmethodinvolvedin．
methanol
biodiesel，whentert-butyl and(NH)2S04
Klebsiella
words：Biodiesel
Key sp．LipascLipasegene
革、医药和洗涤剂等许多工业领域中均有广泛的应
脂肪酶(1ipase，EC3．1．1．3)，又称三酰基甘油
酰基水解酶，广泛存(在于动植物和微生物体内。 用，充分显示了其巨大的应用潜力一1。
脂肪酶不仅可水解三酰甘油生成二脂酰甘油和脂肪 目前国内外对野生微生
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