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2013年7月 Vol.31No.7
July 2013 ChineseJournal of Chromatography 684 ~690
庆祝欧庆瑜先生八十华诞专栏 研究论文 DOI:10.3724/ SP.J.1123.2013.04029
体积排阻色谱法测定低分子量肝素抗凝血因子Xa 的活性
张倩倩ꎬ 康经武∗
(中国科学院上海有机化学研究所ꎬ上海200032)
摘要:发展了一种基于体积排阻色谱测定低分子量肝素(LMWH)抗凝血活性的方法ꎮ 利用肝素与抗凝血酶Ⅲ(AT
Ⅲ)结合后可增强ATⅢ对凝血因子Xa(FXa)抑制作用的原理ꎬ通过测定加入LMWH后FXa水解其生色底物产生
对硝基苯胺(pNA)这一反应的抑制程度确定LMWH 的活性ꎮ 首先将含有一定浓度LMWH 的缓冲溶液与ATⅢ溶
液混合ꎬ然后依次加入FXa和生色底物ꎬ分别孵育一段时间ꎮ 底物被FXa水解ꎬ产生游离的pNAꎮ 体积排阻色谱
可将小分子产物pNA与其他大分子分离开ꎬ因而可以在pNA 的最大吸收波长下得到高灵敏度的测定ꎬ并且不再受
其他成分的干扰ꎮ 该方法重复性好ꎬ灵敏度高ꎬ极大地减少了样品的消耗量ꎬ降低了成本ꎬ并且还可进行各种复杂
样品(如血浆)中LMWH抗FXa活性的监测ꎮ
关键词:体积排阻色谱ꎻ抗凝血因子Xaꎻ低分子量肝素
中图分类号:O658 文献标识码:A 文章编号:1000 ̄8713(2013)07 ̄0684 ̄07
An assay for anti ̄factor Xa activity of low molecular
weight heparins by high performance liquid size
exclusion chromatography
ZHANG QianqianꎬKANGJingwu∗
(ShanghaiInstitute of Organic ChemistryꎬChineseAcademy of SciencesꎬShanghai200032ꎬChina)
Abstract:The “gold standard” assay for monitoring low molecular weight heparins (LMWHs)
activity is the chromogenic ̄based anti ̄factor Xa assay. The methodology of an anti ̄factor Xa
assay is that LMWH is addedto a known amount of excess factor Xa and excess antithrombin.
It will bindto antithrombin andform a triplet complex with factor Xaꎬinhibiting the activity of
factor Xa. Howeverꎬthe residual factor Xa can still hydrolyze chromogenic peptide substrateꎬ
releasing the chromophore for photometric detection. The absorbance is inversely proportional
to the amount of heparin/ LMWH. Theresults aregiven in anticoagulant concentration inunits/
mL of anti ̄factor Xaꎬsuch th
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