抗菌药物体外敏感试验.pdf

抗菌药物体外敏感试验 主要内容 抗菌药物体外敏感实验 耐药机制检测及2010年CLSI主要 变化的解读 WHONET的基本使用 测定抗菌药物在体外对病原微生物有无 抑菌或杀菌作用的方法称为抗菌药物敏 感性试验（Antimicrobial Susceptibility Test），简称药敏试验（AST ）。 药敏试验的目的 帮助临床医师选用效果最佳的药物治疗感染 性疾病。 监测细菌耐药性变迁，进行流行病学追踪， 以控制和预防耐药菌感染的发生和流行，并 为临床经验用药提供依据。 药敏选择标准 CLSI规则 细菌： 肠杆菌科、铜绿假单胞菌、葡萄球菌属、肠球菌属和不 动杆菌属、洋葱伯克霍尔德菌、嗜麦芽窄食单胞菌、其他 非肠杆菌科细菌（MIC） 嗜血杆菌属、淋病奈瑟球菌、肺炎链球菌、α - 、β-溶 血性链球菌 A组 为常规的一级试验组合并常规报告结果 B组 亦可用于一级试验，但应选择性报告，即当A组药 物耐药时可以选择性地报告B组中的同类药物 C组 为补充性药物，可选择性报告 U组 主要用于治疗尿路感染的选择用药 常用的药敏试验方法 纸片扩散法 稀释法 E试验 纸片扩散法（Kirby-Bauer法） 将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平 板上，纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后便不 断地向纸片周围区域扩散，形成递减的梯度浓度。在纸 片周围抑菌浓度范围内的细菌生长被抑制，形成透明的 抑菌圈。 抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与 该药对测试菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关，即抑 菌圈越大，MIC越小。 水解酪蛋白（MH）培养基，pH7.2～7.4，做成琼脂厚 度4mm ，直径90mm的平板。 挑取孵育16-24小时已分纯菌落，置于生理盐水 管中，振荡混匀后校正浓度至0.5麦氏标准。 用无菌棉拭子蘸取菌液，在 试管内壁旋转挤去多余菌液 然后在MH琼脂表面均匀涂布接种3次， 每次旋转平板60度 最后沿平板内缘涂抹1周 平板在室温下干燥3～5分钟，用无菌镊子或商品化的纸片分配 器将含药纸片紧贴于琼脂表面，各纸片中心距离应大于24mm ， 纸片距平板内缘大于15mm。 8. 35℃孵育16～24小时 量取抑菌圈直径 9. 根据抑菌环的直径 ，按照CLSI标准判读， 报告敏感、中介、耐药 稀释法 以一定浓度的抗菌药物与含有被试菌株的培养基 进行一系列不同倍数稀释（通常为双倍稀释）， 经培养后观察其最低抑菌浓度 。 稀释法中用琼脂培养基者为琼脂稀释法，用肉汤 培养基者为肉汤稀释法 。 表7-1 常用抗菌药物容积稀释法 浓度 体积 CAMHB 最终浓度（ 步骤 来源 （mg/mL） (mL) (mL) mg/mL） 1 5120 储存液 1 9 512 2 512 步骤1 1 1 256 3 512 步骤1 1 3 128 4 512 步骤1 1 7 64 5 64 步骤4 1 1 32 6 64 步骤4 1 3 16 7 64 步骤4 1 7 8 8