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鸭MHC I 轻链 cDNA克隆及其蛋白的空间结构 1 1 * 阮小飞 ，蒋一男 ，高凤山，陈卫红，郝慧芳, 夏 春 中国农业大学动物医学院预防兽医系(100094) E-mail:xiachun@ 摘 要 为了阐明鸭主要组织相容性复合体 I 结构并推进其功能研究，本文采用 Full RACE法从 其淋巴细胞 cDNA文库中克隆了鸭 MHC I 轻链 (Anpl-β2m) cDNA. 随后，在 pMAL-p2Ｘ/E.coli 表 达系中可溶性表达了其成熟肽蛋白，并进行了纯化、蛋白酶切和 Western Blot分析鉴定. 最后， 测定了 Anpl-β2m 和 MBP 的圆二色谱(CD)值. Anpl-β2m cDNA 全长 792 bp，包含 18 bp 5’端和 414bp 3’端非翻译区. 其 ORF为 119个氨基酸 (aa)，包含 20个 aa信号肽和 99 aa成熟肽. 在 成熟肽序列的第 25位和 80位为半胱氨酸(C)；并且，在第 80位半胱氨酸附近序列为 “YTCRVDH”， 与免疫球蛋白超基因家族的特征基序 “F/YCXV/AXH”相符. Anpl-β2m氨基酸序列与鸡、鱼、蛙、 人和鼠β2m比较，其同源性为 30.3%-65.9%. CD结果表明 Anpl-β2m α螺旋、β折叠、转角、随 机卷曲分别为 0 aa、50 aa、23 aa 和 26 aa，呈典型的β折叠. 同源模建揭示了 Anpl-β2m三级 结构(3D)是由 7个β片层折叠而成，与人和小鼠 β2m 3D结构相似. 关键词 鸭 β2m 二级结构 同源模建 1阮小飞与蒋一男对本研究有同等贡献. - 1 - 主要组织相容性复合体 (MHC) 指脊椎动物编码与免疫应答直接相关且具有高度多态性的基 因[1]群[1]. MHC可细分MHC I、MHC II和MHC III类. 其中，MHC I类分子由重链和轻链以非共价键 形式结合成复合体. MHC I 重链由α1、α2 和α3 三个胞外区和跨膜区以及胞内区组成；轻链即 β微球蛋白(β2m)为免疫球蛋白超基因家族成员.β2m在内质网与MHC重链及抗原多肽形成复合体 后递呈到细胞表面，从而诱导机体产生特异性的细胞毒性T细胞（CTL）免疫应答[2, 3].近年来的研 究也表明β2m还具有免疫佐剂作用. 1981 年，Suugs等[4] [5] [6] [7] [8] [9] 首先报道了人β2m基因序列.二十多年来，鼠 、猴 、猪 、马 、牛 和 鸡[10]等动物β2m基因也相继被报道. 近年来，本研究小组进行了鸟和鱼类MHC I 研究，首次报道 了鸭[11] [12] 、鹅 以及草鱼的MHC I 和β2m cDNA与基因组结构. 并分析了我国主要品系鸡的MHC I 和 [13] β2m基因的多态性，发现了一类新的鸡β2m等位基因 . 最近，我们又报道了鸡MHC I 重链与轻 链β2m的空间结构[14].当前，禽流感正严重危害着养禽业并威胁到了人类社会.根据鸡对一些禽流 感病毒株(AIV)易感而鸭对其多数不易感，导致了鸭以及水禽成为禽流感病毒的自然宿主. AIV对 鸭是否存在免疫逃逸以及如何提高鸭对AIV的免疫应答，这些疑惑使我们推进了鸭的MHC结构与功 能即与病毒免疫应答相关的研究[11].在报道鸭MHC I重链结构之后，本文对其轻链Anpl-β2m cDNA 进行了克隆、表达与纯化，并进一步测定了