氨基酸分析系统.docVIP

戴安公司AAA-Direct氨基酸分析系统 实验设备及试剂 仪器 BioLC GS50带脱气功能分析泵+LAN (P/N 059493) LC30/LC25柱温箱 ED50A/ED50电化学检测器 安培池AAA-Certified Electrochemical Cell带金工作电极,其中，LC30(P/N 055828); LC25(P/N 055827); AS50(P/N 055826) AminoPac PA10 2mm Column (P/N 055406) AminoPac PA10 2mm Guard Column (P/N 055407) Peaknet6 色谱工作站 AAA-Direct Installation Kit ( P/N 059539) 试剂 50% NaOH 优级纯 醋酸钠 (P/N 059326) 18种氨基酸标准溶液 高纯水 （电阻 ≥ 18.0 MΩ?） pH试纸(广泛) 仪器安装 1.连接仪器, 2.将GS50/GP50泵头的所有内径为0.01mm的黑色peek管全部更换为内径为0.005mm棕色peek管。如果使用GP50泵，还需要在泵的主菜单内将设定的流速100μl改为25μl。或使用戴安公司Low Delay Volume Configuration Conversion Kit ( P/N 056967)进行改装。 3.安装色谱工作站软件 4.用去离子水开机，排除各通道内的气泡 5.使用25μl的进样管，进样管过大会使分离度下降 6.检测池出口使用黑色peek管 淋洗液的配制 50％NaOH 储备液－ 称取50克优级纯NaOH加入50mL去离子水定溶至100毫升，储存于一塑料瓶内保存。 2N NaOH 500mL 取52 mL 50% NaOH 定容至500mL。 0.250M NaOH － 取13.1mL50％NaOH 至1升容量瓶中，用去离子水定容至刻度并立即盖上瓶塞，以防吸入二氧化碳。 1.0M 醋酸钠 － 于750mL去离子水中溶解82.04克醋酸钠，完全溶解后用水定容至1升。建议此淋洗液最好用0.2μm滤膜过滤。 四、pH参比电极标定液 1. pH =7.0 将50mL 0.1 M KH2PO4 和29.1 mL 0.1M NaOH 置于100mL容量瓶中，定容至刻度。 2. pH = 10.0 将50mL 0.05M NaHCO3和10.7 mL 0.1M NaOH置于100mL容量瓶中，定容至刻度。 其中： 0.1M KH2PO4 称 1.3609克定容至100mL; 0.05M NaHCO3 称 0.4201克定容至100mL; 0.1M NaOH 称 0.4000克定容至100mL; 五、氨基酸标准溶液 1． O.1M HCL含20mg NaN3/L 氨基酸稀释液 用氨基酸稀释液稀释氨基酸标准浓度至5μM或10μM。此溶液放在冰箱内可保存1周，在室温下，可保存48小时。 六、系统清洗 用2N NaOH清洗所有需要使用的淋洗液瓶、泵头管路，至少使用40mL。清洗液自泵头处直接排出（此时色谱柱暂不安装）。 用去18.0 MΩ去离子水冲洗系统30分钟。 七、安装淋洗液瓶 1. 将淋洗液 E1、E2、E3分别加到淋洗液瓶内，立即通入高纯氮气，密封保存。 2. 分别排除各淋洗液通道内的气泡，以保证系统压力稳定。 用新配制的淋洗液清洗每一通道和比例阀，体积不少于30mL,时间约至少12分钟。 淋洗液瓶内不安装过滤头。 八、系统平衡 1．按照氨基酸分析的淋洗液色谱条件，开泵用淋洗液(76％/ 24%）(A/B)平衡系统，并打开检测池的开关。选择pH测量模式。此时pH读数应在12.1~ 13.0之间。如果不在此范围内，则需要检查淋洗液的比例是否正确（76％/ 24%）(A/B)。如果淋洗液正确，则需要重新校正参比电极。 2. 系统平衡30分钟后，背景信号应 90 nC, 大于此数，建议用2 N NaOH重新冲洗系统。 九、在PeakNet6中输入所使用的波形和梯度程序。 见表1，表2 十、在PeakNet中运行氨基酸分析方法，开始分析。 见图1. 十一、注意事项 在安装色谱柱、管路、配制淋洗液和分析的过程中都应戴表面无滑石粉的塑胶手套，以防止沾污。 所有实验用水的纯度都应达到18.0MΩ。 所使用的NaOH淋洗液必须要用50％NaOH液体配制。 淋洗液最好要真空脱气，或用经过煮沸的高纯水配制。 图1. 氨基酸标准分析谱图 进样体积: 25μL 标准: NIST=2.5μmol/mL in 0.1 M HCl 溶液 稀释标准(用去