芮勇宇2011-3-14临床细菌学检验.ppt

临床细菌学检验 芮勇宇 南方医科大学 南方医院 检验科/检验系 医学博士、博士后，主任技师（正高）、副研究员，硕士导师，支部书记； 南方医院检验科《临床微生物检验室》主任； 南方医院检验系《临床微生物学教研室》主任； 办公手机137 2985 2982，E mail: yongyurui@ 第一部分：标本分类、每一类标本采集注意事项、涂片及鉴定结果解读； 第二部分：药敏结果解读； 第三部分：难鉴定细菌真菌分子鉴定新技术。 一、血液标本病原菌检验 目前我国社会老龄化日趋严重，慢性病及恶性肿瘤、器官移植、爱滋病和结核病病人不断增多，侵袭性诊疗技术广泛应用，败血症发病率不断增加。 败血症病死率30%以上；早期病原学诊断和合理抗生素治疗，明显降低败血症病死率。 血液培养的送检指征： 发热38℃或低温36℃； 白细胞增多10×109/L，“核左移”白细胞增多； 粒细胞减少，成熟的多核白细胞1×109/L； 血小板减少；皮肤粘膜出血； 心率90次/分；呼吸频率20次/分； 二氧化碳分压32mmHg； 昏迷；多器官衰竭。 最好在抗生素使用前采集，若已用抗菌药须，则尽量避开血药浓度的高峰期； 建议第一次可在病人发热初期或高峰期采集，根据病人发热情况，在24h内再取2-3份标本，以提高病原菌检出率。 标准血培养瓶（蓝色帽）： 帽子和标签纸左上方为蓝色， “Standard 10 Aerobic/F”， 用于成人需氧菌和真菌培养， 血液量3-10ml ，8-10ml最佳。 中和抗生素的树脂瓶（灰色帽）： 帽子和标签纸左上方为灰色， “PLUS+Aerobic/F” ， 血液量3-10ml ，8-10ml最佳。 厌氧瓶（黄色或橘红色帽）： 帽子和标签纸左上方为黄色， “Standard Anaerobic/F”， 血液量3-7ml ，5-7ml最佳。 中和抗生素的儿童瓶（粉红色帽）： 帽子和标签纸左上方为粉红色， “PEDS PLUS/F”, 血液量1-3ml。 采集标本前先开申请单，到检验科细菌室或门诊领取血培养瓶； 采血前先在培养瓶标签纸左侧空白处（箭头所指处）填写抽血时间和病人科别、床号和姓名； 不要在培养瓶条形码上涂写，以免影响扫描。 注射器采血后，将血培养瓶帽子揭下，橡皮由金属皮（围脖）固定于瓶上； 将橡皮塞用70%酒精消毒，注射器针头刺穿橡皮塞将血注入培养瓶内； 橡皮塞裸露即可。 细菌室接到已采集血液的培养瓶后，立即放入自动血液培养检测仪，自动培养及实时检测。 结果报告形式 阳性初步结果报告： 仪器阳性报警，90%以上阳性标本24h内检出； 取出阳性瓶，对血液涂片及革兰氏染色； 立即将涂片结果（G+、G-细菌，球菌或杆菌，或真菌）电话通知相应科室，并在网上发出； 利用阳性血液进行K-B法药敏试验，第二天将初步药敏结果电话通知相应科室。 结果报告形式 阳性最终结果报告： 将阳性血液接种血平板培养细菌； 第二天将血平板上生长的细菌鉴定及MIC法药敏试验；第三天发鉴定及MIC法药敏结果的正式报告。 阴性结果报告： 如培养5天仍为阴性，再接种血平板培养一天，核实为阴性后再发报告。 二、中段尿标本病原菌检验 检测泌尿系统感染； 一般进行细菌和真菌培养、菌落计数和药敏； 也可离心后对沉渣进行涂片检查，革兰染色或抗酸染色； 也可用于淋球菌培养和涂片检查。 最常采集中段尿，晨起第一次尿送检最佳； 先用肥皂水、或1：1000高锰酸钾水溶液冲洗女性外阴部及尿道口或男性尿道口，再用灭菌水清洗，最后用灭菌纱布檫拭；排尿弃去前段尿，留取中段尿约10ml于无菌容器内加盖送检。 尿道病原菌可在温暖尿液中繁殖，中段尿标本采集后应尽快送检，否则将影响病原菌计数的准确性； 排尿困难者可导尿，避免多次导尿所致尿路感染，导尿包必须为无菌的合格产品。 “培养出3种以上细菌，疑采集污染，重留标本”： 如培养出3种或以上细菌，且无优势菌；约10%的标本不合格，采集时污染，采集中段尿（尤其女性）最好由专门医护人员指导采集，以减少污染。 “培养出少量某种细菌、菌落计数结果”： 如菌量较少 103ml，但为单一菌种，可能为采集时污染，也可能是真正的感染，临床医生可根据病人临床表现判断或再留取标本送检。 “培养出某种细菌、菌落计数结果、药敏结果”： 一般认为细菌或真菌105／ml ，且必须有优势，才可以确定为感染，对优势菌进行鉴定和药敏。 104／ml至105／ml，也有意义。 三、粪便标本病原菌检验 对肠道感染进行病原学诊断。 涂片革兰染色查细菌、球/杆菌比、真菌。 涂片暗视野查弧菌；抗酸染色。 培养沙门氏和志贺菌；培养弧菌；培养真菌； 菌群失调病人，对占优势细菌进行鉴定药敏。 标本采集： 挑取含脓、血或粘液粪便约2-3