FAAS法测定噪声性耳聋豚鼠外淋巴液钙含量.docVIP

火焰-原子吸收分光光度法测定噪声性耳聋 豚鼠耳蜗外淋巴液钙含量 叶怀庄 李莉（浙江大学医学院，杭州310031） 催彩霞（浙江省中医学院，杭州310003） 摘要：建立了噪声暴露豚鼠耳蜗外淋巴液中钙含量的火焰-原予吸收分光光度测定方法。采用常规进样方式，缩短预喷雾和积分时间。结果 钙浓度线性范围在0-5.00μg/mL，最低检测限为0.02μg/mL，回收率98.66%，相对标准差0.79%。外淋巴液钙含量模型组为262.14±77.93μg/mL、对照组为155.56±27.01μg/mL，两组比较有显著性差异（P＜0.05）方法简便、可靠，可满足了外淋巴液钙含量测定的要求。 关键词：火焰-原子吸收分光光度法，豚鼠，外淋巴液，钙 Determination of Ca in External Lymph in Inner Ear of Guinea Pig with noise deaf by FAAS Ye Huaizhuang, Lily (Zhejiang University Medical School, Hangzhou, China, 310031) Cui caixia (zhejiang Traditional Chinese Medical School, Hangzhou, China, 310003) Key Words: Flame atomic absorption spectrometry(FAAS)，Guinea pig，External lymph，Calcium 钙离子对耳蜗听觉功能具有重要生理意义，它使外淋巴液保持平衡，促进内耳细胞营养与代谢，参与催化外淋巴液中的生化反应，在“去极相”进入耳蜗“内毛细胞”促进递质释放、调节“外毛细胞”运动及其侧壁和顶膜上的钾通道的开放，从而参与耳蜗微音电位的产生[1-2]。钙离子又常常在有害因素导致耳蜗细胞损伤的过程中起不良媒介作用。如噪声等对内耳的损伤，常伴有耳蜗外淋巴液中钙等元素含量的改变。因而测定耳蜗外淋巴液中钙等元素含量，可了解内耳损伤及经受噪声的影响。 目前耳蜗外淋巴液中钙测定的原子吸收光度法常采用微量进样法[3-4]，以克服样品量不足的限制，但均需对原有仪器的进样装置加以改装，这样不利于推广。本研究不改变仪器装置，试图通过缩短预喷雾和积分时间，以达到快速检测目的。 1 材料与方法 1.1 仪器及器皿 AA-680原子吸收分光光度计（日本岛津仪器公司），钙空心阴极灯（日本HAMAMATSU PHOTONICS K.K.），空气压缩机（能控制压力在400-600 kPa），可调微量移液器（200μL、1000μL，法国Gilson公司），微量注射器20μL（上海精密仪器公司），TDT系统自制声控装置。 1.2 试剂 (1) 盐酸ρ=1.18g/mL，优级纯； (2) 盐酸溶液（1+99）； (3) 镧溶液（10g/L）：称取1.73g高纯氧化镧（La2O3），溶于10mL盐酸(2)中，移入100mL容量瓶内，用去离子水稀释至刻度。 (4) 钙标准使用液：国家标准溶液GSB G 62012-90（2001），1.0mg/mL（5%HCl介质）。 1.3 动物模型制备 选用健康杂色豚鼠24只，耳廓反射灵敏，性别不拘，由浙江大学动物中心提供，体重250-350g，分为实验组16只和对照组8只。 清理豚鼠双侧外耳道，对于实验组用TDT系统自制声控装置发出白噪声100 dB SPL，经过ER-10C型耳塞式耳机传入双侧外耳道鼓膜处，每天4小时，连续14天。实验结束时，腹腔注射1%戊巴比妥钠（40mg/kg）麻醉，经监测实验组动物无脑干感音电位，建成双侧噪声性耳聋动物模型。 1.4 样品制备 用木锤敲击头部处死豚鼠，取出两侧耳蜗，在手术显微镜下用20μL微量注射器从豚鼠内耳中吸取外淋巴液8.0μL放入洗净塑料管中，加镧溶液120μL，再加1+99盐酸溶液l072μL，加盖摇匀，供Ca测定用。以去离子水代替样品同法制备样品空白。 1.5 仪器条件 灯电流6mA、狭缝0.5nm、分析线波长422.7nm；乙炔2.0L/min、空气8.0 L/min、燃烧头10cm；预喷雾2秒、积分时间3秒。 1.6 标准曲线制备 用微量移液器吸取钙标准使用液0.05、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50mL，置于50mL容量瓶中，各加镧溶液5.0mL，以1+99盐酸定容至刻度，配成Ca浓度为1.00、2.00、3.00、4.00、5.00μg/mL标准系列。按照“1.5节”仪器条件进样测定，结果见表1，经统计处理，得到回归方程Y=0.0877X+0.001，钙浓度在5μg/mL以下呈线性，相关系数R为0.9990，最低检测限为0.02μg/mL。 表1 标准曲线测