REACH法规 第五卷译稿-8.docVIP

第III部分. 改进OECD筛选测定(方法C.4-B)III.1. 测定方法原理 一份已测定体积的矿质培养基(包含一种已知浓度的测定物质(10-40 mg DOC/L)作为其唯一的微量有机碳源)以每升培养基0.5mL的用量加入流出液混合物在222℃黑暗中或散射光下通气在28天的周期里, 伴随着频繁的DOC分析,降解不断进行.生物降解度用DOC浓度降低(空白培养液试验修正)来III.2. 测定方法描述 III.2.1. 仪器(a) 锥形瓶,根据DOC分析所需体积从250mL到2L. (b) 振动机,可容纳锥形瓶,自动控温或恒温条件下使用,有足够功率维持所有锥形瓶的有氧条件(c) 带有合适的薄膜过滤装置(d) DOC分析仪(e) 溶解氧测定仪.(f) 离心机.III.2.2. 矿质培养基的准备 储备液的制备,见I.6.2. 将10mL溶液(a)用80mL水稀释,将1mL溶液(b)加入(d)中,用水稀释到1L此方法只用0.5mL流出液/L作为培养液,因此培养基可能需要用痕量元素和生长因子加强.可以在每升最后的培养基加入1mL以下溶液痕量元素溶液四水硫酸锰, MnSO4?4H2O 39.9mg硼酸,H3BO3 57.2mg七水硫酸锌,ZnSO4?7H2O 42.8mg钼酸铵,(NH4)6 Mo7O2434.7mg Fe-EDTA螯合物(FeCL3已二胺四乙酸) 100.0mg 用水稀释至1000mL维生素溶液: 15.0mg酵母萃将酵母萃溶于100mL水通过0.2微米膜滤菌或新鲜制备III.2.3. 培养液的制备和预处理培养液取自浓集植物的二次流出液或主要来自生活污水的试验值见I.6.4.2.和 I.6.5.每升矿质培养基0.5mL用量III.2.4. 锥形瓶的准备例如,将矿质培养基每份800mL引入2L锥形瓶,足量试验物质和参比物质储备液加入10-40mg DOC/L的.检验PH值,如有必要调至7.4.以0.5mL/L的污水流出量加入锥形瓶(见. I.6.4.2.).同时在矿质培养基中准备培养液调节剂但不加入试验或参比物质.如有要求,用一个容器通过加入一份包含有矿质培养基中对照量试验物质和参比物质浓聚物的溶液来检验试验物质可能的抑制作用.同样,如有必要的话,再准备一个无菌锥形瓶通过未接种的化学物质溶液来检验试验物质是否降解(见 I.6.6.).另外,如怀疑试验物质显著地被玻璃,污泥等吸附,首先初步估计可能的吸收程度进而对该物质检验的可行性(见表1).准备一个装有试验物质,培养液和杀菌剂的锥形瓶.将所有装有矿质培养基的锥形瓶补足1L,混合后从每一瓶中取样测定DOC的初始浓度(见附件II.4).盖住锥形瓶 (如用铝箔),但允许与外界空气自由气体交换.然后将导管通入振动机准备开始试验.III.2.5. 典型试验中的锥形瓶数锥形瓶 1 和 2: 测定悬浮液 锥形瓶 3 和 4: 空白培养液 锥形瓶 5: 过程控制 最好和当有必要时: 锥形瓶 6: 非生物无菌对照锥形瓶 7: 吸附对照 锥形瓶 8: 毒性对照也见 1.6.7. III.2.6. 进行试验在整个试验中,每隔指定时间测定每个瓶中的DOC浓度两次,足够频繁以能够测定10天周期的开始和10天周期末的减少百分数.每次测定取最少需要量的试验悬浮液.如有必要,加适量水稀释防止样品大量蒸发损失.取样前充分混合培养基并且保证附着在器壁上的物质溶解或悬浮. 取样后立即薄膜过滤或离心(见附件II.4).当天分析滤过或已离心的样品,否则在2-4°C保存不超过48,或低于-18°C保存更长的时间III.3. 试验数据和结果报告 III.3.1. 数据处理III.3.2. 试验结果的有效性 III.3.3. 报告 见I.8. III.4. .数据记录表以下给出一张数据记录样表.改进OECD筛选试验1. 实验室2. 试验开始日期 3. 试验物质名称:储备液浓度: mg试验物质/L培养基初始浓度: mg试验物质/L4. 培养液来源: 给定处理方法:预处理(如有):反应混合物中悬浮固体浓度:mg/L5. 碳测定碳分析器： nr n天后DOC(mg/L) 0 n1 n1 n3 nx 试验物质 加培养液 1 a1 a2 a,平均 Ca(t) 2 b1 b2 b,平均 Cb(t) 无试验物质 的空白培养液 3 c1