第二章石蜡制片方法-2.pptVIP

染色程序： 切片脱蜡下降至蒸馏水 在2％或4％铁矾中媒染30分钟—2小时 在清水中洗5分钟，用蒸馏水漂洗 在0.5％苏木精中染色1-24小时 用清水冲洗5分钟 用2％或4％铁矾分色30—60分钟(镜检至颜色适中) 经35％酒精、50％酒精，70％酒精、80％酒精、95％酒精、纯酒精两次脱水，每级脱水5分钟 二甲苯透明两次、每次1小时 用加拿大树胶封片。 染色原理简介 染色的物理作用 1.毛细作用或渗透作用 被染物质是有孔隙的，染料可以因为渗透作用或毛细作用而进入组织的内部。 2.吸收作用 组织吸收染液后进行牢固的结合，所染颜色与溶液的颜色相同。 3.吸附作用 当组织浸于染液内，组织吸附色素粒子而呈现颜色。 染色的化学作用 植物细胞内的不同化学成分，对染料有不同的亲和力，因此细胞具有选择性的着色能力，使细胞的不同成分染成不同颜色。 1.细胞中的酸性物质，易被碱性染料所染，而碱性物质，易被酸性染料所染。 2.染液的pH值对染色有很大影响，一般碱性物质如细胞质在低pH的染液内易着色，酸性物质如细胞核在高pH(偏碱)的染液内易着色。 * * 粘片 切好的蜡带经显微镜检查合格后，即可用粘贴剂将蜡片粘贴在载玻片上，这个步骤称之为“粘片”。 粘贴剂配方 赫伯特粘贴剂 溶液甲： 动物胶(明胶) l克 蒸馏水 lOO ml 甘油 15 ml 石碳酸(结晶) 2克 溶液乙： 甲醛 4ml 蒸馏水 lOO ml 粘贴剂的配制 先将动物胶放入蒸馏水中，在36℃的温箱中使其慢慢溶解，待全部溶解后再加入甘油及石碳酸，并搅伴使其完全溶解，经过滤后贮于瓶中。 粘片方法 1.在擦净的载玻片上滴上一小滴溶液甲，用洁净的小手指涂匀。 2.加上1—2滴溶液乙，将蜡片放在液面上(蜡片的光滑面向下)。 3.将带有蜡带的载玻片放在展片台上(温度在40℃左右)，蜡片受热后即慢慢伸平，待完全伸平后，可吸去多余的水，经烤干后放入切片盒中或放室内让其自然干燥。 蜡带的两个面 染色过程中切片脱落的原因分析 1.所用的载玻片不清洁。 2.粘片剂已腐败变质。 3.粘片时将光滑面向上。 4.切片厚而小。 5.切片皱折未能充分伸展。 6.切片未能完全干燥。 脱蜡 脱蜡即用二甲苯彻底地溶去切片上的石蜡，一般通过2—3缸二甲苯进行脱蜡，约需15—30分钟。室温过低，则需延长脱蜡时间。蜡脱不干净，则使切片染色困难。 复水 脱蜡之后，再经过各级不同浓度的酒精复水，即由浓度高的酒精渐至浓度低的酒精。切片复水至那一级之后才能进行染色。 染料与染色 染料的分类 根据染料的来源划分 1.天然染料 由植物或动物中提取，如苏木精，洋红，地衣红等。天然染料虽然种类不多，但在生物染色中普遍使用。 2.人工染料 由人工合成的染料。人工合成染料均可由煤焦油中的一种或数种物质制成，故可统称为煤焦油染料。大多数染料属于此类。 根据染料的化学性质划分 1.碱性染料 含有碱性助色团氨基或二甲氨基，主要有色部分为阳离子。通常为氯化物，也有磷酸盐或醋酸盐。如苏木精、碱性品红、番红等。 2.酸性染料 含有酸性助色团如羟基、羧基，主要有色部分为阴离子。通常是钠盐、钾盐或铵盐，如固绿、伊红、桔红G、酸性品红等。 3.中性染料 或称复合染料，它们的阳离子和阴离子都有颜色。如中性红等。 根据染色的性能而分 1.核染料 能与细胞核中的染色质发生作用的染料，包括天然染料的苏木精、洋红及人工染料的番红、甲苯胺蓝、甲基绿、碱性品红等。 2.细胞质染料 能与细胞质发生作用的染料，如伊红Y、固绿、桔红G、苯胺蓝、酸性品红等。 3.细胞壁染料 能与细胞壁发生作用的染料，如番红、苯胺蓝等。 4.组织化学染料 如苏丹Ⅲ、溴酚蓝、碱性品红等。 5.荧光染料 这种染料能和细胞中某种物质相结合，可在紫外线或短光波的照射下被激发出荧光。 6.活体染料 可用作细胞活体染色的染料，如中性红和许多荧光染料等。 几种常用染料的性质、配制及染色程序 番红 番红是组织学上应用最广泛的一种染料。对高等植物中木质化细胞及角质化组织、蛋白质、染色体、孢子、花粉外壁都可染成鲜艳的红色，分别与固绿、苯胺蓝等作二重染色，与结晶紫、桔红G作三重染色。 番红为碱性染料，溶于水，酒精。既可整染，又可片染、滴染。 几种番红染液的配方 1.番红水溶液 番红 1g