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20．等温滴定量热法 差示扫描量热法（功率补偿型DSC） A、等温滴定量热法(Isothermal Titration Calorimetry, ITC)是近年来发展起来的一种研究生物热力学与生物动力学的重要方法，它通过高灵敏度、高自动化的微量量热仪连续、准确地监测和记录一个变化过程的量热曲线，原位、在线和无损伤地同时提供热力学和动力学信息。 B、等温滴定微量量热法（ITC）可以检测滴定反应过程中热量变化，用来表征生物分子间的相互作用，ITC 迅速成为研究生物大分子结合反应的有力工具。 C、等温滴定量热（ITC）通过滴定反应热放出或吸收的热力学分析，提供结合反应相关的能量过程的定量特征。 D、差示扫描量热技术:在样品和参比同时程序升温度或降温且保持两者温度相等的条件下，测量流入或流出样品和参比物的热量差与温度关系的一种技术 E、差示扫描量热（DSC）技术是在程序控温下测量输入到位置与参比物的功率差与温度的关系的技术。 19．软电离源：电喷雾电离ESI，基质辅助激光解析电离MALDI 硬电离源：化学离子化CI，电子轰击电离EI，快原子轰击FAB 对于不同的分子应选择不同的离解方法。通常称能给样品较大能量的的电离方法为硬电离方法，而给样品较小能量的电离方法为软电离方法，后一种方法适用于易破裂或易电离的样品。 主要应用于液相色谱-质谱联用仪。它的主要部件是一个多层套管组成的电喷雾喷咀。最内层是液相色谱流出物，外层是喷射气，喷射气常采用大流量的氮气，其作用是使喷出的液体容易分散成微滴。另外，在喷嘴的斜前方还有一个补助气喷咀，补助气的作用是使微滴的溶剂快速蒸发。在微滴蒸发过程中表面电荷密度逐渐增大，当增大到某个临界值时，离子就可以从表面蒸发出来。离子产生后，借助于喷咀与锥孔之间的电压，穿过取样孔进入分析器。 电喷雾电离源是一种软电离方式，即便是分子量大，稳定性差的化合物，也不会在电离过程中发生分解，它适合于分析极性强的大分子有机化合物，如蛋白质、肽、糖等。电喷雾电离源的最大特点是容易形成多电荷离子 激光解吸源是利用一定波长的脉冲式激光照射样品使样品电离的一种电离方式。被分析的样品置于涂有基质的样品靶上,激光照射到样品靶上,基质分子吸收激光能量，与样品分子一起蒸发到气相并使样品分子电离。激光电离源需要有合适的基质才能得到较好的离子产率。因此，这种电离源通常称为基质辅助激光解吸电离(Matrix Assisted Laser Description Ionization, 简称MALDI)。 所谓分辨本领，是指质谱仪分开相邻质量数离子的能力。即：对两个相等强度的相邻峰，当两峰间的峰谷不大于其峰高10%时，认为两峰已经分开，其分辨率为： R = m1 /（m2-m1）= m1/Δm 其中m1、m2为质量数，且m1m2，故在两峰质量数较小时，要求仪器分辨率越大。 15．样品制备的方法有哪些？ 负染 糖包埋 单宁酸（Tannic Acid）包埋 冰包埋 16．什么叫负染，是做什么的？ 原理及方法：用高电子密度的染色剂沉积在蛋白质分子周围，使蛋白质的电子显微像具有较高的反差（衬度） 17．糖包埋法的优缺点比较。 葡萄糖与蛋白质所处的溶液介质有类似的物理和化学性质，且不易挥发。用其取代蛋白质溶液中的水介质，形成类似水的环境，可使结构不受外来介质的影响 包埋剂：葡萄糖、海藻糖 特点： 保持生物大分子结构不变形； 分辨率较高，理论上可达3-4? 衬度差 11．自旋量子数I=1/2 自旋: 基本粒子的内禀属性 质子，中子，电子都有自旋，自旋量子数I= 1/2 12．什么是弛豫，化学位移？ 弛豫是高能态的自旋核释放能量返回低能态的过程。通过弛豫过程可以获得稳定的核磁共振信号。 弛豫过程有两种： 自旋晶格弛豫，也称纵向弛豫。以弛豫时间T1表示。 自旋-自旋弛豫，也称横向弛豫。用弛豫时间T2描述。 由电子云的屏蔽作用所引起的共振时磁场强度的移动，称为化学位移 化学位移与原子的核外电子云密度有关，后者又与原子核的化学环境有关。因此，可根据化学位移的大小，来考察原子核所处的化学环境，从而对化合物进行结构分析 13．参比核：四甲基硅烷 为了确定化学位移的大小，选一个参比核，规定其化学位移为零。对于1H谱常以四甲基硅烷（TMS）为参比。参比核的屏蔽作用很强，在最高场有一个强的尖峰，定义其化学位移为0，在其低场区（左方）的化学位移为正值。 10．结构修正的目标是什么？ 确定相位的主要方法有哪些？它们的优缺点分别是什么？ 同晶置换法(SIR/MIR）：适用于全新的蛋白质结构测定；要求制备多个同晶重原子衍生物；计算较复杂 多波长反常散射法（MAD）：适用于全新蛋白质结构测定；要求一个重原子衍生物；要求波长可调的同步辐射X射线源；对数据收集的测量精度要