蛋白质含量的测定方法.docVIP

蛋白质的测定方法-凯氏微量法 有手工滴定定氮和自动定氮仪定氮，实验者可根据经济条件设备而定。 1.原理 蛋白质是含氮的有机化合物。食品与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用过量硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质含量。 2NH2(CH2)2COOH+13H2SO4→(NH4)2SO4+6CO2+12SO2+16H2O (NH4)2SO4+2NaOH→2NH3+2H2O+Na2SO4 2.方法 本法参照GB 5009.5 -85,适用于各类食品及饲料中蛋白质的测定。 3.试剂 所有试剂均用不含氨的蒸馏水配制。试剂均为分析纯。 1）硫酸铜 2）硫酸钾 3）浓硫酸 4）2%硼酸溶液（或1%的硼酸） 5）混合指示剂：1份0.1%甲基红乙醇溶液与5份0.1%溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合。也可用2份0.1%甲基红乙醇溶与1份0.1%次甲基蓝乙醇溶液临用时混合。 6）饱和氢氧化钠：500g氢氧化钠加入500mL水中，搅拌溶解，冷却后放置数日，澄清后使用。 7）0.01mol/L或0.05mol/L盐酸标准溶液：需标定后使用(配制及标定方法见附录) 4.仪器 1)消化炉； 2)凯氏定氮蒸馏装置； 3)万分之一电子天平 4)凯氏定氮蒸馏装置：如图所示 1.热源 2. 烧瓶 3. 玻璃管 4. 橡皮管5．玻璃杯 6. 棒状玻塞 7. 反应室 8. 反应室外壳 9. 夹子 10. 反应室中插管 11. 冷凝管 12. 锥形瓶 13. 石棉网 图3.4 微量凯氏蒸馏装置示意图 5. 操作步骤 1样品处理：精密称取0.1~2.0g固体样品或2~5g半固体样品或吸取液体样品5~20mL，放入100mL或500mL凯氏烧瓶中，加入0.2g硫酸铜，0.3g硫酸钾及3~20mL浓硫酸，放置过夜后小心加热，待内容物全部炭化，泡沫完全停止后，加强火力，并保持瓶内液体微沸，至液体呈蓝绿色澄清透明后，取下放冷后用约2～10mL蒸馏水冲洗瓶壁，混匀后继续加热至液体呈蓝绿透明，取下放冷，小心加10~20mL水混匀 ，放冷后，移入100mL容量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀备用。取与处理样品相同量的硫酸铜、硫酸钾、硫酸按同一方法做试剂空白实验。 2按图装好定氮装置，于水蒸气发生瓶内装水至约2/3处，加甲基红指示液数滴及数毫升硫酸，以保持水呈酸性，加入数粒玻璃 珠以防暴沸，加热煮沸水蒸气发生瓶内的水。 3向接收瓶内加入10mL ,1~2%硼酸溶液及混合指示液1滴，并使冷凝管的下端插入液面下，吸取10mL样品消化稀释液由小玻璃杯流入反应室，并以10mL水洗涤小烧杯使之流入反应室内，塞紧小玻璃杯的棒状玻璃塞。将3~10mL饱和氢氧化钠溶液倒入小玻璃杯中，提起玻璃塞使其缓缓流入反应室，立即将玻璃塞盖紧，并加水于小玻璃杯中以防漏气。加紧螺旋夹，开始蒸馏。蒸气通入反应室使氨通过冷凝管而进入接收瓶内，蒸馏2min，移动接收瓶，使冷凝管下端离开液面，然后用少量中性水冲洗冷凝管下端外部，再蒸馏1min取下接收瓶，以0.01或0.05mol/L盐酸标准溶液滴定至灰色或蓝紫色为终点。 同时吸取10mL试剂空白消化液按5.3操作。 6. 计算 X =(V-V0)×C× 0.014× B/m ×100× F 式中：X—样品中蛋白质含量，g／100g； V—样品消耗盐酸标准液的体积，mL； V0—空白消化液消耗盐酸标准液体积，mL； C—盐酸标准液摩尔浓度,mol/L； 0.014—1mol/L 盐酸标准液1 mL相当氮克数； B—定容体积/取液量； m—样品的质量，g； F—氮换算为蛋白质计算因子。蛋白质的氮素含量不同，故换算因子不同。详见下表。 蛋白质计算因子 食物计算因子：蛋，鱼，肉及制品，禽类，玉米，高粱，豆类，水果和蔬菜类 6.25；乳及乳制品 6.38；大米 5.95；小麦面 普通粉 5.70；全麦，大麦，燕麦，裸麦,小米，小麦面全麦 5.83；小麦 5.80；黄豆 5.71；花生 5.46；芝麻、向日葵、核桃和榛子 5.30；麸皮 6.31 7. 举例 设取样品0.1000g，消化后稀释至100 mL。取10 mL样品稀释液，标准盐酸为0.01 mol/L，空白滴定为0.12 mL，样品滴定用去的标准盐酸为3.21 mL，测得样品中蛋白质百分率为： （3.21-0.12）×0.01×0.014×10／0.01× 100× 6.25 ＝（3.21-0.12）×8.75＝27.0% 8. 附录： （1）标准HCl溶液（0.1 mol/L HCl）配制及标定： 配制：量取9毫升HCl，加适量水稀释至100