豆奶中蛋白质的测定.pptVIP

原理：蛋白质是含氮的有机化合物。食品与硫酸和硫酸铜、硫酸钾一同加热消化，使蛋白质分解，碳和氢被氧化为二氧化碳和水逸出，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后以硫酸或盐酸标准滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质的量。 1.有机物中的胺根在强热和CuSO4，浓H2SO4 作用下，硝化生成（NH4）2SO4。　　 （其中CuSO4做催化剂） 　　 2.在凯氏定氮器中与碱作用，通过蒸馏释放出NH3 ，收集于H3BO3 溶液中 。 　 3. 用已知浓度的H2SO4（或HCI）标准溶液滴定，根据HCI消耗的量计算出氮的含量，然后乘以相应的换算因子，既得蛋白质的含量 。　　 1、硫酸钾 作为增温剂，提高溶液沸点，纯硫酸沸点 340℃，加入硫酸钾之后可以提高至400℃以上。也可加入硫酸钠，氯化钾等提高沸点，但效果不如硫酸钾。沸点提高加速了反应过程。 2、硫酸铜???作为催化剂。还可以作消化终点指示剂（做蒸馏时碱性指示剂）。 3、盐酸（mol/L） 4、2％硼酸溶液 5、40％氢氧化钠溶液 6、混合指示剂：把溶解于95％乙醇的0.l％溴甲酚绿溶液10毫升和溶于95％乙醇的0.l％甲基红溶液2毫升混合而成． 7、0.05NHCl标准溶液或0．05N硫酸标准溶液． 1、凯氏微量定氮仪一套。 2、消化炉 3、定氮瓶 盐酸标准滴定溶液的配制 一、实验步骤： 1、配制0.5mol/L的盐酸标准滴定溶液：量取45mL盐酸，加水定容至1000mL，摇匀备用。 2、标定盐酸标准滴定溶液：准确称取0.8g在270—300摄氏度下干燥至恒重的的基准无水碳酸钠，加50mL水使之溶解，再加10滴溴甲酚绿-甲基红混合指示剂。用本溶液滴定0.05mol/L的盐酸标准滴定溶液，至其由绿色转变成紫红色，煮沸2min，冷却至室温，继续滴定至溶液有绿色变为暗紫色。做3个平行样品，同时做试剂空白实验校正结果。 二、计算公式： 式中：c---盐酸标准滴定溶液的实际浓度，mol/L m---基准无水碳酸钠的质量，mg 0.0530---的毫摩质量，g/mmol 转变成紫红色 煮沸2min,冷却后 滴定至暗紫色 0.5mol/L盐酸标定数据记录表 无水碳酸钠标定盐酸标准滴定溶液为0.5786mol/L。将此溶液稀释10倍，得出结果为0.05786mol/L。因此，实验所需盐酸标准滴定液的浓度为0.05786mol/L. 编号 检测项目 样品的质量/mg 空白消耗的盐酸体积/mL 样品消耗盐酸的体积/mL 盐酸的浓度/mol/L 盐酸浓度的平均值/mol/L CV 1 标定盐酸标准滴定液 0.8016 0.88 26.94 0.5804 0.5786 0.006 2.8% 2 0．8074 27.06 0.5743 3 0.8603205 27.40 0.5811 注意事项！ 本实验要求的盐酸标准滴定溶液为0.05mol/L，由于标准滴定溶液的浓度太小，如果直接配制会导致误差过大，最终影响实验的结果。因此，我们在配制标准滴定溶液时选用了稀释法。首先配制0.5mo/L的盐酸标准滴定溶液，然后用无水碳酸钠标定此溶液，最后将标定得出的数据除以10，得出的最终结果为实验所需盐酸标准滴定溶液的浓度。 本实验所用的盐酸标准滴定溶液，是用我们配制的0.5mol/L的盐酸标准滴定液稀释10倍所配成的。 蛋白质测定的分析步骤： 1、? 样品处理：精密称取5~5.5g样品移入干燥的500ml定氮瓶中，加入0.2g硫酸 铜，6g硫酸钾及20毫升硫酸，稍摇匀后放入消化炉中消化，至液体呈蓝绿色澄清 透明后，再继续加热0.5小时。取下放冷，小心加20ml水，放冷后，移入100ml容 量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀备用。取 与处理样品相同量的硫酸铜、硫酸钾、硫酸铵同一方法做试剂空白试验。 2、安装好定氮装置：于水蒸气发生器内装水约2/3处加甲基红指示剂数滴及数毫升硫酸，以保持水呈酸性，加入数粒玻璃珠以防暴沸，用调压器控制，加热煮沸水蒸气发生瓶内的水。 3、蒸馏： 想接收瓶内加入10ml 2%硼酸溶液及混合指示剂1滴，并使冷凝管的下端插入液面下，吸取10.0ml样品消化液由小玻璃杯流入反应室，并以10ml水洗涤小烧杯使流入反应室内，塞紧小玻璃杯的棒状玻璃塞。将10ml 40%氢氧化钠溶液倒入小玻璃杯，提起玻璃塞使其缓慢流入反应室，立即将玻璃盖塞紧，并加水于小玻璃杯以防漏气。夹紧螺旋夹，开始蒸馏，蒸气通入反应室使氨通过冷凝管而进入接收