实验五 微生物的大小和数量的测定.ppt

实验五 微生物的大小和数量的测定 一、实验目的与要求： 学习使用血球记数板测定微生物数量的方法。 学习使用目镜测微尺和镜台测微尺在显微镜下测定微生物大小的方法。 二、实验原理---血球计数板对酵母菌培养液计数： 血球计数板的构造 二、实验原理---酵母菌大小测定 测量工具及构造 三、实验器材 显微镜 血球计数板、镜台测微尺、目镜测微尺 酵母菌悬液（测数用）、酵母菌装片（测定大小用） 长颈胶头吸管、盖玻片、擦镜纸等。 四、实验步骤---酵母菌悬液计数 1、取清洁无油的血球计数板，检查计数室，找出计数室的中方格与小方格； 2、在计数室上面加盖玻片，取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴一小滴，使菌液自行渗入，计数室内不得有气泡； 3、静止5min后，用低倍镜观察并将计数室移至视野中央； 4、在高倍镜下计数：按要求计数五个中方格的菌数总值，然后求得每个中格的平均值。乘上25（或16）就得出一大格中的总菌数，最后再换算到每mL菌液中的含菌数。 四、实验步骤---酵母菌悬液计数 5、压在方格线上的菌体，以压在底线和右侧线上的菌体计入本格内；遇到有芽体的酵母时，若芽体和母体同等大，就按单个酵母计数。 6、计数完毕后，血球计数板要立即清洗干净，并用吸水纸吸干，最后用擦镜纸擦干净，并放回盒内。 四、实验步骤---酵母菌大小的测定 1、目镜测微尺的校正：在高倍镜下，看清镜台测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺与镜台测微尺的刻度平行，移动推动器，使目镜测微尺的0点与镜台测微尺的某一刻度重合 2、仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度。计算两刻度间目镜测微尺的格数和镜台测微尺的格数。镜台测微尺的刻度每格长10μm，所以： 目镜测微尺每格长度（ μm）=（镜台测微尺格数×10）/目镜测微尺格数 3、菌体大小的测定：取下镜台测微尺，将酵母菌染色标本置于载物台上，然后在高倍镜下用目镜测微尺测量菌体的大小。 五、实验结果 将显微计数结果记录于下表中。T表示五个中方格中的总菌数；D表示菌液稀释倍数。 目镜测微尺标定结果：40×镜下 倍目镜测微尺每格长度是 μm。 六、问题与讨论 为什么目镜测微尺必须用镜台测微尺来校正？ 在显微镜下直接测定微生物数量有什么优缺点？ 绘制观察到的酵母菌生物图。 * * ﹟ ﹟ 细胞数/ml=[每中方格平均细胞数×25（16）/10-4] ×稀释倍数 镜台测微尺 目镜测微尺 目镜测微尺的校正 （X1+X2+X3+X4+X5） 5 × 25（或16） × 10 × 1000 ×稀释倍数 酵母菌细胞数/mL= ? 各中方格中菌数 T D 二室平均值 个/ml 1 2 3 4 5 第一室 ? ? ? ? ? ? ? ? ? 第二室 ? ? ? ? ? ? ? ? ? 菌号 酵母的直径大小测定结果 ? 目镜测微尺格数 实际直径/μm 1 ? ? ? 2 ? ? ? 3 ? ? ? 4 ? ? ? 5 ? ? ? 均值 ? ? ? *