抗生素微生物检定标准操作规程042.doc

山 西 振 东 制 药 起草部门： 质量保证部 题目： 抗生素微生物检定标准操作规程 第 1 页 共 22 页 起草人 审核人 审核人 审核人 批准人 部门/职务 部 门 部门负责人 质量保证部 生产负责人 质量受权人 签 名 日 期 版本号：00 颁发部门： 生效日期： 分发部门： 目 的：建立抗生素微生物检定标准操作规程 范 围：抗生素类药 依 据：《中国药品检验标准操作规程》2010年版 责 任：化验员 严格按操作规程操作 班组长 对检验人员的操作进行监督和指导 中心化验室主任 对检验人员进行培训考核，并对检验人员操作进行监督和指导 内 容： 1 术语或定义抗生素微生物检定包括两种方法，即管碟法和浊度法。 2抗生素管碟测定法 2.1仪器与用具 操作室 光线明亮，操作室应分为两部分，彼此分开，其中一部分为一般操作室，一部分为半无菌操作室。半无菌操作室应设有紫外线灭菌灯，并附设空气净化（空气净化级别为100～10000级）及空调设备，控制室温度在20~25℃之间，达到无菌或半无菌状态。操作台应稳固，台面用玻璃板，并用水平仪调节至水平。注意操作，避免室内抗生素污染。 双碟 内径约90mm高16～17mm硬质玻璃或塑料培养平皿，碟底厚薄均匀，水平透明，无色斑气泡。碟底平度检查，可将双碟放在水平台上，下垫一张白纸碟内加水2～3ml，再滴加蓝墨水，观察蓝色深浅是否一致。 陶瓦盖 内径约203mm，外径108mm，平坦，吸水性强，应定期清洗、干燥或干热灭菌。 钢管 内径（6.0±0.1）mm，高（10.0±0.1）mm，外径（8.0±0.1）mm或（7.8±0.1）mm，每套钢管重量差异不超过±0.05g，内外壁及两端平坦，管壁厚薄一致。每次使用后应置1:1000新洁尔灭溶液内，浸泡2h以上，灭菌后再洗涤，先用水洗涤，超声波超声30min后用沾有去污粉的纱布条串擦内外壁，水冲洗，沥干，再用蒸馏水冲洗3次后，置带盖的容器内，在150～160℃干热灭菌2h，备用。 钢管放置器 有6孔和4孔两种。放置于无菌或半无菌的平台上，钢管下落时应垂直平稳、位置正确。双碟升降平稳。应保持清洁，防止抗生素污染。可定期用75%乙醇棉擦拭落管筒及储管杯。置钢管的玻璃管应定期干烤灭菌。 恒温培养箱 以隔水式为宜，温度平稳，波动小。除另有规定外，依各品种项下要求设定温度，温度波动范围为35～37℃或24～26℃，箱内网状隔板上放置带孔的玻璃板并调节至水平。 灭菌刻度吸管用于吸取菌液及培养基。用后应立即置5%石炭酸或1:1000新洁尔灭溶液中消毒后，再按玻璃容器的常规洗涤法洗涤。洗涤沥干后在吸口处塞入脱脂棉（松动、透气），置适宜容器中，在120℃以上干热灭菌2h或121℃蒸气灭菌30min，烘干备用。 玻璃容器包括定量移液管、刻度吸管、容量瓶等，均应符合“常用玻璃量器国家计量检定规程”的规定。每次使用前用清洁液浸泡，水冲洗，并用蒸馏水或去离子水冲洗3次，沥干。 称量瓶 重量在10g以下。用毕先用水冲洗，沥干，置清洁液浸泡2h以上，然后分别用水、蒸馏水或去离子水冲洗3次，置洁净平皿中，在120℃干热灭菌3h，待冷置60～70℃时，取出置于干燥器中备用。滴管 用玻璃管拉制，管口平滑。使用前在清洁液浸泡，分别用水、蒸馏水或去离子水冲洗3次，置适宜容器中，在120℃干热灭菌3h后，备用。 天平 分析天平，精密度0.1mg，经计量检定。 抑菌圈直径（面积）测量仪应符合抑菌圈测量仪检定规程的规定。 游标卡尺 精度0.0mm，长度1mm。 超净工作台有效工作面局部洁净度100级。用于试验菌的接种传代或菌悬液制备。超净工作台须置洁净工作室或半无菌室内。 2.2 试液 灭菌缓冲液制备缓冲液的试剂应为分析纯，制备后的缓冲液应澄明，分装于玻璃容器内，经121℃蒸汽灭菌30min备用。 磷酸盐缓冲液（pH5.6） 取磷酸二氢钾9.07g，加水使成1000ml，用1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至5.6，滤过，在115℃灭菌30分钟。 磷酸盐缓冲液（pH6.0） 取磷酸氢二钾2g与磷酸二氢钾8g，加水使成1000ml，滤过。 磷酸盐缓冲液（pH7.0） 取磷酸氢二钾9.39g与磷酸二氢钾3.5g，加水使成1000ml，滤过。 磷酸盐缓冲液（pH7.8） 取磷酸氢二钾5.59g与磷酸二氢钾0.41g，加水使成1000ml，滤过。 磷酸盐缓冲液（pH10.5） 取磷酸氢二钾35g，加10mol/L氢氧化钾溶液2ml，加水使成1000ml，滤过。 2.3 培养基 配制培养基的各成分原料质量对抑菌圈边缘清晰度及试验结果影响较大，因此应对原材料进行预试验，挑选适当的品牌使用。