PARP酶抑制剂诱导转化细胞逆转及外源ras癌基因丢失的研究StudiesonReversionofaTransforman.pdf

遗传 HEREDITAS(Beijing)18(3):6-81996 PARP酶抑制剂诱导转化细胞逆转及 外源 ；a：癌基因丢失的研究① 杨其伟 董元舒 陈雅文 陈德风 南（开大学分子生物学研究所，天津 300071) 摘 要 用5mmol/LPARP抑制剂苯甲酞胺处理经 c-Ha-T24-ra，活化癌基因转染得到的转化细胞系， 处理4周后发现转化细胞系的某些细胞生物学特性发生了改变，呈现出正常细胞的某些特性．伴随这一 现象，检测到细胞中整合的外源 T24-ra，基因发生了丢失． 关健词 转化细胞逆转，ras癌基因，基因丢失 StudiesonReversionofaTransformantLineandLossofExogenous rasOncogeneafterTreatmentwithanInhibitorofPARPEnzyme YangQiweiDongYuanshu ChenYawen ChenDefeng (InstituteofMolecularBiology,NankaiUniversity,Tianjin300071) Abstract AtransformantlineobtainedbytransfectionofNIH3T3cellswithc-Ha-T24-rasgenewas treatedwith5mmol／Lbenzamide,aninhibitorofPARPenzymefor4weeks.Somechangesincellular propertiesofthetransformantlinewereobserved.Concomitantwiththesechangeswasthedeletionofthe exogenousc-Ha-T24-raswhichhadbeenintegratedintogenomicDNAofrecipientcells. KeywordsPoly(ADP-ribosyl)ation,Transformedcellreversion,rasoncogene,Deletion 聚腺普二磷酸核糖基化作用 (P（AR）是在生物体内的聚腺昔二磷酸核糖聚合酶(PARP,EC.2.4230)）催化下， 以NAD为底物，对蛋白质进行翻译后修饰，从而使聚腺昔二磷酸核糖共价连接到受体蛋白上的过程 (1.3)．从 PARP酶发现至今的短短二十多年中，已经证明它与染色质的结构与功能的调节，DNA的修饰、复制、重组与重 排、RNA的转录、染色体畸变及生物信息传递等许多重要的生物事件密切相关 ’〔，’，〕． 近年来，已有实验表明PAR还与肿瘤的发生和细胞分化有关．Ohashi等 ’〔。，曾报道了PARP抑制剂3-氨 基苯甲酸能够诱导鼠畸胎瘤的分化；Tseng等 ”（）以该酶的另一种抑制剂香豆素阻断一rra，基因诱导的细胞转化； Diamond(12）等也发现3-氨基苯甲酸能够抑制，-src,v-mos,v-raf及；a，基因对NIH3T3细胞的转化．我们利 用PARP酶的NAD位点抑制剂苯甲酞胺B（A）诱导了c-Ha-T24-r。基因转化细胞系3T3(T24)的逆转．对其机 制的进一步研究发现，逆转细胞基因组DNA中整合的外源T24-ra：基因发生了丢失． 1材 料 和 方 法 1.1细胞及质粒 ①国家自然科学基金资助项目。 3期 杨其伟等：PARP酶抑制剂诱导转化细胞逆转及外源ras癌基因丢失的研究 7 小鼠成纤维细胞 NIH3T3由北京师范大学生物系王永潮教授赠送．质粒 pMAMneo-T24-ra：和 pSV2neo-T24-ras均为本实验室构建 2)（． LZ细胞培养 NIH3T3细胞常规培养于含 10％胎牛血清的DMEM或RPM11640培养基中．培养箱中CO2浓度为5%,温 度为37C． 1.3DNA转染 外源DNA以磷酸钙法转染NIH3T3细胞，培养液中加人G418至终浓度为400pg/ml筛选抗性细胞，每4- 5天换液一次．巧天后观察抗性细胞的出现． 1.4BA对细胞的处理 将2.5x10个‘细胞接种于100ml培养瓶中，第二天加人BA，培养至细胞达到30-