丁香假单胞大豆致病变种harpin编码基因的克隆表达与功能研究.pdf

南京农业大学学报 2013 ，36 (1):6－ 12 http :/ / nauxb． njau． edu． cn Journal of Nanj ing Agricultural University doi :10 ． 7685 /j ． issn． 1000 －2030 ． 2013． 01． 002  张岩，伍辉军，周晓辉，等． 丁香假单胞大豆致病变种harpin 编码基因的克隆表达与功能研究［J］． 南京农业大学学报，2013 ，36 (1):6－12 丁香假单胞大豆致病变种harpin 编码基因的 克隆表达与功能研究 张岩，伍辉军，周晓辉，高学文* (南京农业大学植物保护学院/ 农作物生物灾害综合治理教育部重点实验室，江苏南京210095) 摘要:采用PCR 方法从丁香假单胞大豆致病变种(Pseudomonas syringae pv． glycinea )A1 和 S1 菌株中分别克隆到大小 为1 026 和1 038 bp 的hrp Z 基因(hrp ZPsgA1 和hrp ZPsgS1 )，对该基因进行了原核表达和功能研究。SDS显示其表达产 3 3 物为相对分子质量62 × 10 的融合蛋白，harpinZP sgA1 和harpinZP sgS1 的相对分子质量约为35 × 10 。harpinZP sgS1 的粗提蛋白经 GSTrap FF 纯化后质量浓度可达1． 1 mg ·mL－ 1 。生物活性检测表明，该蛋白对热稳定，对蛋白酶K 敏感，可以在非寄主植物 烟草上激发过敏反应，过敏反应可以被真核生物代谢抑制剂抑制，并且对烟草有明显的促生作用。序列比对发现，来自丁 香假单胞大豆致病变种的hrp Z 基因可分为2 类，一类以hrp ZPsgA1 为代表，包括hrp ZPsg12 ，另一类以hrp ZPsgS1 为代表，包括来 自r0 和Race4 菌株的hrp Z 基因。这2 类hrp Z 基因的核苷酸同源性为79% ，氨基酸同源性为77% ，均富含甘氨酸，不含半 胱氨酸，与假单胞菌属以外的其他革兰氏阴性植物病原细菌harpin 编码基因不存在相似性。 关键词:丁香假单胞大豆致病变种;harpin 编码基因;GST 融合表达;烟草;过敏性反应;促生 中图分类号:S432 ． 42 文献标志码:A 文章编号:1000 －2030 (2013)01－0006－07 Cloning ，expressing and function of a harpin-encoding gene from Pseudomonas syringae pv． gly cinea * ZHANG Yan ，WU Huijun ，ZHOU Xiaohui ，GAO Xuewen (College of Plant