酵母细胞固定化31086.pptVIP

酵母细胞的固定化 北京川布兰生物技术开发有限公司制作2010.11 实验目的 一、固定化技术基础知识 二、酵母细胞固定化技术 固定化技术：利用物理或化学方法将酶或细胞固定在一定空间内的技术，包括包埋法、化学结合法（将酶分子或细胞相互结合，或将其结合到载体上）和物理吸附法。 包埋法 化学结合法 物理吸附法 一、固定化技术基础知识 酶更适合采用化学结合和物理吸附法固定化 细胞多采用包埋法固定 细胞固定化材料 常用的包埋载体：明胶、琼脂糖、海藻酸钠、醋酸纤维素和聚丙烯酰胺等。 特点：不溶于水的多孔性载体材料。 材料用具 水浴锅；量筒；注射器；烧杯；三角瓶；玻璃棒。 酵母液；CaCl2溶液；海藻酸钠溶液；10%葡萄糖溶液 二、酵母细胞固定化技术 操作步骤 1．制备固定化酵母细胞 （1）配制CaCl2溶液： 0.83gCaCl2＋150mL蒸馏水→200mL烧杯→溶解备用。 （2）配制葡萄糖溶液： 15g葡萄糖+150mL蒸馏水→200mL烧杯→溶解备用。 （3）配制海藻酸钠溶液： 0.7g海藻酸纳＋10mL水→50mL烧杯，水浴加热，并不断搅拌，使之溶化，蒸馏水定容到10mL。 （4）海藻酸钠溶液与酵母细胞的混合： 将溶化的海藻酸钠溶液冷却至室温，加入活化酵母细胞液，搅拌均匀后吸入到注射器中。 （5）固定化酵母细胞： 以恒定速度缓慢地将注射器 中的溶液滴加到CaCl2溶液中， 形成凝胶珠状颗粒，溶液中浸泡 30min左右使其充分固定。 2．固定化酵母细胞的发酵 （6）冲洗：将固定的酵母细胞凝胶珠用蒸馏水冲洗2～3次。 （7）发酵：150mL10％葡萄糖＋固定化酵母细胞→200mL锤形瓶→25℃发酵24h（1h后即可观察现象）。 发酵前 发酵后 酵母细胞固定化之后，发酵效率得到提高，并且保存更加方便。 实验结论 （一）酵母细胞的活化 在缺水的状态下，微生物会处于休眠状态。酵母细胞所需要的活化时间较短，一般需要0.5～1h，教师需要提前做好准备。 （二）加热使海藻酸钠溶化是操作中最重要的一环，涉及到实验的成败，须谨慎操作，并且在加热过程中要不断搅拌。 （三）检验凝胶珠的质量是否合格的方法：用镊子夹起一个凝胶珠放在实验桌上用手挤压，如果凝胶珠不容易破裂且没有液体流出，就表明凝胶珠制作成功。 注意事项 * 圈1不好看，用后面的红圈作为序号更加好看 修改一下本片子的动画格式，不需要动画格式 字体与前一张片子统一 操作步骤请与实验时的步骤保持一致 * 把前一张片子发酵前和发酵后的图片放在实验结论部分，再解释一下实验现象。 本片子太满，精简片子，把解释的内容放在备注中 活化就是让处于休眠状态的微生物重新恢复正常的生活状态。 海藻酸钠的浓度涉及到固定化细胞的质量。如果海藻酸钠浓度过高，将很难形成凝胶珠；如果浓度过低，形成的凝胶珠所包埋的酵母细胞的数目少，影响实验效果。 刚形成的凝胶珠应在CaCl2溶液中浸泡一段时间，以便形成稳定的结构。 * 圈1不好看，用后面的红圈作为序号更加好看 修改一下本片子的动画格式，不需要动画格式 字体与前一张片子统一 操作步骤请与实验时的步骤保持一致 * 把前一张片子发酵前和发酵后的图片放在实验结论部分，再解释一下实验现象。 本片子太满，精简片子，把解释的内容放在备注中 活化就是让处于休眠状态的微生物重新恢复正常的生活状态。 海藻酸钠的浓度涉及到固定化细胞的质量。如果海藻酸钠浓度过高，将很难形成凝胶珠；如果浓度过低，形成的凝胶珠所包埋的酵母细胞的数目少，影响实验效果。 刚形成的凝胶珠应在CaCl2溶液中浸泡一段时间，以便形成稳定的结构。