醋酸成分测定与分析.docVIP

食醋成分分析 俞中锋，陈以满，霍东娟，朱吉 氨基酸成分的测定 采用高效阴离子交换色谱及脉冲安培检测法分离并测定了食醋中多种氨基酸。用不同比例的氢氧化钠溶液、乙酸钠溶液及水组成的混合溶液作为淋洗液，以梯度淋洗方式将分离柱上的氨基酸先后洗脱并测定。用提出的方法分析了4种不同品牌的食醋样品，共测得18种氨基酸，此方法毋需柱前或柱后衍生化操作，对18种氨基酸的检出限在1．7---20.0,ug/L范围内。根据测定每种氨基酸中所得保留时间值算得的相对标准偏差(竹一6)均小于1.2％，作标准加入法测定了各氨基酸的回收率，其值在84％～108％之间。 1试验部分 1．1仪器与试剂 Dionex ICS 2500 BioLC离子色谱装置，包括GSS0四元梯度泵，LC30柱温箱(30℃)，AS50自动进样器(25 pL进样)，ED50A电化学检测器。Chromeleon 6．5色谱工作站。氨基酸标准(生化级)储备液均为0．01 mg，为防止微生物生长，用20 mg叠氮化钠溶液稀释配制工作溶液。氢氧化钠溶液：用球状的氢氧化钠加水配成浓度为19．3 tool·L_1溶液，静置24 h后，取13．1 mL用水稀释至l L，配成浓度为250 mmol·L-1溶液。乙酸钠溶液：1 mol/L，称取乙酸钠820 g，用水溶解后稀释到l L，用0．20m尼龙滤膜过滤。水为去离子水。为防止淋洗液(氢氧化钠溶液和乙酸钠溶液的混合溶液)吸收空气中二氧化碳，淋洗液瓶上方需要施加大约40～50 kPa的氮气进行保护。 1．2分析条件 色谱柱：AminoPac PAl0分析柱(250 mm×2 mm)和保护柱(40 mm×2 ram)。定量环体积25肛L，柱温箱温度设为30℃。淋洗液由去离子水、250 mmol·L-1氢氧化钠溶液和l mol·L叫乙酸钠溶液按照一定的梯度程序混合得到(表1)，流速0.25 mL/min。电化学检测器：金工作电极，Ag-AgCl参比电极。 2结果与讨论 2．1分离和检测条件的优化 以氢氧化钠和乙酸钠为淋洗液，选择合适的淋洗液梯度，18种常见氨基酸可在高效阴离子交换色谱柱上实现分离。其中，氢氧化钠溶液淋洗能力较弱，用来洗脱弱保留的碱性氨基酸和脂肪族氨基酸；乙酸钠溶液洗脱能力强，用来洗脱强保留的酸f生氨基酸和芳香族氨基酸，如组胺酸、苯丙氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、胱氨酸和酪氨酸可以从色谱柱上洗脱。为了保证每次进样分析时色谱柱状态一致，每次分离结束后需要用一定浓度的氢氧化钠溶液平衡色谱柱25 min，从而提高测定结果的重现性。电极电位会影响金电极的使用寿命以及测定结果的灵敏度和精密度，试验选择的电位波形见图 淋洗时间t/min 淋洗液提及组成比 曲度 H2O 250mmol/LNaOH 1mol/LNaAc 0.0 84 16 2.0 84 16 12.0 68 32 凹性曲线梯度 16.0 68 32 24.0 36 24 40 凹性曲线梯度 40.0 36 24 40 40.1 20 80 线性梯度 42.1 20 80 42.2 84 16 线性梯度 65.5 84 16 表一：氨基酸分离中梯度淋洗所用淋洗液的组成比例弱，用来洗脱弱保留的碱性氨基酸和脂肪族氨基酸；乙酸钠溶液洗脱能力强，用来洗脱强保留的酸f生氨基酸和芳香族氨基酸，如组胺酸、苯丙氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、胱氨酸和酪氨酸可以从色谱柱上洗脱。为了保证每次进样分析时色谱柱状态一致，每次分离结束后需要用一定浓度的氢氧化钠溶液平衡色谱柱25 min，从而提高测定结果的重现性。 2．2线性范围与精密度 按优化的分离和检测条件，测定常见的氨基酸时方法的灵敏度高，检出限在1．7～20．0 Pg/L之间；平行6次进样时各组分保留时间的相对标准偏差均小于1．2％。2．3样品测定与加标回收试验各品牌食醋均从超市购买，测定前先用0．20 pm的尼龙膜过滤除去溶液中的悬浮颗粒物，适当稀释后直接进样分析。加入1 mg/L叫氨基酸标准溶液于食醋样品中，按试验方法进行测定，各组分的加标回收率为84％----108％。 各品牌食醋中氨基酸含量的测定结果见表2。 氨基酸名称 样品中氨基酸的测得值 ρ/(mg/L) 白醋 1号食醋 2号食醋 3号食醋 精氨酸 — 13.25 11.50 16.67 赖氨酸 - - - - 谷氨酰胺 - 2.58 3.80 5.90 丙氨酸 - 4.36 3.60 5.25 苏氨酸 - 0.17 0.10 0.08 甘氨酸 - 7.05 0.80 0.89 结氨酸 - 0.72 - - 丝氨酸 - 0.57 0.20 0.30 脯氨酸